【生物课件】分子生物学与生物技术_徐增富_Dec_17_2004.pdf

分子生物学和生物技术 徐 增 富 博士 教授, 博士生导师 (生物化学与分子生物学) E-mail: lssxzf@; Tel: 8411 2516 中山大学生命科学学院 生物防治国家重点实验室 基因工程教育部重点实验室 分子生物学和生物技术 1. 克隆基因 2. 鉴定基因结构 3. 研究基因表达调控 4. 研究基因功能 5. 生物信息学 6. 基因转化 7. 基因工程和蛋白质工程 真核基因的结构 真核基因的结构 Cloning into a Plasmid Sanger DNA测序方法 三核苷酸 (TCA) 传统的 DNA测序方法 自动 DNA 测序 克隆基因的方法 待克隆的基因可分为两大类: 1. 已知序列(DNA 或蛋白质序列) 2. 未知序列 克隆基因的方法 — 已知序列 (DNA 或蛋白质序列) Homology-based cloning (基于同源性的克隆法) 基本原理:来源于不同物种的基因具有一定的同源性 • 如果已经从植物、动物或微生物中分离到一个基 因, 就可以根据该基因的序列从另一种生物中克隆 这个基因. • 基因编码序列的同源性大大高于非编码区. 克隆已知序列 (DNA 或蛋白质序列)基因的方法 — Homology-based cloning 1. 人工合成（短肽） 2. 用已知序列的DNA 片段制备探针, 筛选文库 （cDNA文库或基因组文库） 3. 根据已知序列设计PCR 引物, 以待分离基因的植 物核DNA 或cDNA 为模板, 进行PCR 扩增 聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction，PCR ） Designing oligonucleotide probes based on protein sequence cDNA文库或基因组文库 • 购买 (基因组文库) • 赠送 • 自己构建 (cDNA文库) Genomic and cDNA libraries Commercial Source Premade genomic and cDNA Libraries (Stratagene; Clontech) Custom cDNA Library Services- Clontech Gift Homemade (especially cDNA Library) SMART™ PCR cDNA Synthesis Kit - Clontech The differences between cDNA clones and genomic DNA clones Construction of a Human Genomic Library cDNA Library A library composed of complementary DNAs (cDNAs) —synthetic DNAs transcribed from a set of RNAs through the action of the reverse transcriptase in vitro. Isolation of eukaryotic mRNA by oligo-dT column Screening of a cDNA or genomic l