醣类分析及快速分析技术之发展与应用.PDFVIP

■ 成果報告 行政院國家科學委員會補助專題研究計畫 □期中進度報告 毛細電泳/質譜、醣類分析及快速分析技術之發展與應用 計畫類別：■ 個別型計畫 □ 整合型計畫 計畫編號：NSC 91－2113－M－002－053 計畫主持人：何國榮　 教授 成果報告類型(依經費核定清單規定繳交)：□精簡報告 ■完整報告 本成果報告包括以下應繳交之附件： □赴國外出差或研習心得報告一份 □赴大陸地區出差或研習心得報告一份 □出席國際學術會議心得報告及發表之論文各一份 □國際合作研究計畫國外研究報告書一份 處理方式：除產學合作研究計畫、提升產業技術及人才培育研究計畫、列 管計畫及下列情形者外，得立即公開查詢 □涉及專利或其他智慧財產權，□一年□二年後可公開查詢 執行單位：台灣大學化學所 1 Part. A 低輔助流毛細電泳質譜界面的設計以及於樣品線上濃縮的 應用 一、摘要 毛細電泳界面當中，鞘流界面由於使用容易，堅固耐用，並且對緩衝溶液的 限制較少因此是目前最廣泛被使用的界面。然而鞘流界面主要的問題在於毛細電 泳分離出的分析物遭受鞘流溶液大量的稀釋而導致偵測靈敏度下降。為了解決稀 釋的問題最直接的方法就是使用無鞘流界面的設計。然而無鞘流界面一直無法被 廣泛使用的原因在於此界面需要使用末端小口徑毛細管，因此很容易堵塞或是斷 裂，並且此界面需要在毛細管末端鍍上一層導電層，導電層的製備不易並且壽命 短，再加上緩衝溶液在選擇時受限於電灑法離子化的要求，因此這一個高靈敏度 界面一直無法被廣泛的使用。 有鑑於此，本實驗室曾嘗試改進這些問題，針對末端小口徑毛細管造成毛細 管壽命降低的問題，我們使用大口徑的斜口毛細管來取代一般無鞘流界面所使用 的小口徑毛細管，使用斜口的設計所得到了靈敏度與縮小口徑的毛細管相近，此 外由於開口較大，因此壽命以及耐用度上均較較小口徑毛細管長。至於毛細管末 端導電的問題，我們採用導電銀筆將毛細管末端導電化，使用此塗佈方式不但可 以得到導電度極佳導電層之外，塗佈的壽命以及對抗有機溶液的侵蝕能力均有所 提升。 為了解決無鞘流界面緩衝溶液限制的問題，我們發展了三套使用低流速輔助 溶液的毛細電泳質譜界面。這些設計結合了無鞘流以及鞘流界面的優點，由於這 些界面對輔助溶液的需求不高，不像鞘流界面有嚴重的稀釋問題，因此較傳統無 鞘流界面有較高的靈敏度。相較於無鞘流界面，由於使用輔助溶液，因此對毛細 電泳緩衝溶液的限制較少，並且可以很穩定的操作在負離子模式下。 在這三個低輔助流界面中，使用微電灑針頭製成的低流速鞘流界面是最先發 展的設計，此設計雖然具有不錯的靈敏度，但由於此界面使用縮小口徑的毛細管 以及微電灑針頭的設計，因此界面的壽命較短。再加上此界面無法直接控制鞘流 溶液的流速，因此我們便發展了雙斜口界面。雙斜口界面由於不需要縮小毛細管 開口的口徑，因此界面的壽命較縮小口徑的界面來得長。並且此界面還可以使用 針筒幫浦控制輔助溶液的流速使此界面能進一步的最佳化。此外，此界面的死腔 體積極小，因此使用此界面所得到的分離解析度以及靈敏度都均較前一個設計 佳。為了更進一步的將低輔助流界面普及化，我們嘗試改進最普遍使用的商業化 鞘流界面，將界面的鞘流管以及毛細管均磨成斜口製成斜口鞘流界面。此方法可 以有效的降低鞘流界面對鞘流溶液的要求。此設計除了可以控制鞘流界面的流速 之外，在操作上也和傳統鞘流界面一樣容易，雖然此界面對鞘流溶液的需求較雙 2 斜口界面高，但此界面由於製作容易，因此有利於低輔助流界面的普及。 除了界面本身的改進之外，本計畫並針對毛細電泳質譜濃度靈敏度不佳的問 題提出改進的方法。針對靈敏度不佳的問題我們將微電灑針頭低流速鞘流界面和 大體積樣品注入法結合，藉由這樣的組合，使用微電灑針頭界面時分析酚類化合 物時可以達到ppb 的靈敏度。 關鍵字：低輔助流、毛細電泳質譜、線上濃縮。 Abstract: With the increasing availability of electro