第一章 遗传物质的分子结构、性质和功能教程文件.ppt

四膜虫rRNA的剪接采用自我剪接方式 最简单的核酶二级结构——槌头状结构 (hammerhead structure) 底物部分 通常为60个核苷酸左右 同一分子上包括有催化部份和底物部份 催化部份和底物部份组成锤头结构 除rRNA外，tRNA、mRNA的加工也可采用自我剪接方式。 核酶研究的意义 核酶的发现，对中心法则作了重要补充； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 核 酸 的 变性、复性和杂交 denaturation， renaturation and hybridization of nucleic acid 第 四 节 一、核酸的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后理化性质发生变化： 260nm的紫外吸收值增加 粘度降低，浮力密度升高 二级结构的改变等。 例：变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与 DNA分子G+C含量成正比。一般70～85℃. 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的应用 二、核酸的复性(renaturation) 定义: 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 减色效应 DNA复性时，其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 复性条件：①有足够的盐浓度。 ②有足够高的温度，比Tm低20～25℃。 在DNA变性后的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件（温度及离子强度）下，就可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。 三、核酸的杂交(hybridization)与应用 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 探针 (probe) 一小段用同位素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 探针技术 探针种类： DNA探针——单链或双链 RNA探针——单链 印迹技术 印迹技术（blotting）是指将存在于凝胶中的生物大分子转移（印迹）于固定化介质上并加以检测分析的技术。 目前，这种技术已被广泛用于DNA、RNA和蛋白质的检测。 印迹技术的类别及应用 （一）DNA印迹技术 (Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。 （二）RNA印迹技术 (Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 （三）蛋白质的印迹分析 (Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 也称为免疫印迹技术 （immunoblotting) 其他 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip) 三种印迹技术的比较 （六）DNA的四级结构 真核生物中核酸与蛋白质相互作用形成的核糖体、剪接体，即可看成核酸的四级结构。 另外DNA缠绕组蛋白构成核小体。 二、RNA的结构 （Structure of RNA） RNA的种类、分布、功能 RNA单链结构 环状结构（loop） 局部双螺旋结构 三级结构 折叠 分子伴侣 生物活性分子 具有催化活性的RNA 称为核酶。 1、DNA的基本功能： 是以基因的形式荷载遗传信