抗耐药菌新型生物制剂的研究应用.ppt

抗耐药菌新型生物制剂的研究应用黄青山 教授复旦大学 遗传学研究所 抗生素的发展历程 20世纪最伟大的药物——青霉素，早在1928年时，就被弗莱明在英国伦敦圣玛丽医院发现提纯。1943年青霉素完成了商业化生产并正式进入临床治疗。这使他在全世界赢得了25个名誉学位、15个城市的荣誉市民称号以及其他140多项荣誉，其中包括诺贝尔医学奖 。 抗生素的发展历程 1952年，瓦克斯曼发现了链霉素——第一个能够有效治疗人类肺结核的药物。 随后，氯霉素（1947年）、新霉素（1949年）、土霉素（1950年）、红霉素（1952年）、四环素（1953年）、头孢菌素（1959年）、奎诺酮类（1980年）……相继被发现。 美国医事总署曾在1979年发表一项重要声明说：我们对传染病的研究总算可以告一段落了。现在最重要的事就是好好地研究癌症和心血管疾病。 耐药性细菌感染严重形势 传统抗生素的作用机理 新型生物抗菌制剂成为研究热点 1 生物工程酶类（溶葡球菌酶等）－－特点：高效，不易耐药，专一性，无毒无残留。 2 噬菌体,噬菌体裂解酶 3 抗菌肽 4 其他 溶葡萄球菌酶（lysostaphin) 国内外新药研究申报情况 国外只有biosynexus公司正在进行溶葡萄球菌酶的鼻内乳膏剂和外用乳膏剂的临床前和临床试验。 国内只有上海高科联合生物技术研发有限公司正在进行溶葡萄球菌酶的治疗烧伤感染一类新药的研制，已于2005年获SFDA临床批件，目前正在进行II临床试验。 本公司溶葡萄球菌酶的研发情况 1、对葡萄球菌的杀菌效果 二、溶葡萄球菌酶的克隆表达 美国： 枯草杆菌 球状芽孢杆菌 乳酸杆菌等表达；人药（FDA规定），兽药－牛乳腺炎 英国：转基因小鼠，转基因牛 德国：啤酒酵母，乳酸杆菌表达 印度：大肠杆菌胞内表达 中国: 大肠杆菌外分泌表达，人药，兽药.本公司在国际上首次成功构建了大肠杆菌外分泌表达重组溶葡球菌酶基因工程菌，解决了该酶作为药物的工程菌问题。 申请了PCT国际专利(专利号：2006/001640)； 三、溶葡萄球菌酶的药效学研究 对葡萄球菌等G+菌具有强杀菌作用 对敏感和耐药金葡菌的MIC50低至0.25 U/ml 对敏感和耐药表葡菌的MIC50低至为0.5U/ml 对耐药MRSA表现出高效的杀菌作用 重组溶葡萄球菌酶对奶牛乳房炎分离的MRSA和MSSA均具有较强的抑杀效果，二者之间没有显著性差异。分离出的所有MRSA对氨苄西林、苯唑西林、青霉素均100%耐药。分离出的MSSA对青霉素100%耐药。 中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所药理研究室评价重组溶葡萄球菌酶对临床分离的168株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）、89株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的体外抗菌活性 MRSA(ATCC 33591)经不同重组溶葡萄球菌酶浓度连续诱导，由于在4MIC浓度下菌液一直澄清，无法进行诱导试验，所以菌株经2MIC、1MIC、1/2MIC连续诱导50代后，经生化鉴定菌株未受污染，仍显示金黄色葡萄球菌特性，对苯唑西林、红霉素、克林霉素、头孢西丁的耐药性质也未发生变化。抑菌试验表明：5、10、15、20、30、40和50代菌种MIC结果与原始菌株所测得的浓度无明显差异，未能筛选到耐药的菌株。 四、溶葡萄球菌酶的一般药理学研究 皮下注射400～4000U/kg，对清醒动物的心电、血压和呼吸没有明显影响。 皮下注射2000~20000 U/kg，对清醒动物的一般行为、运动协调和自发活动没有明显影响。 与阈下剂量戊巴比妥钠合并使用，没有协同催眠作用。 五、溶葡萄球菌酶的药代动力学研究 正常兔静脉注射125I-rLysostaphin后的分布 六、溶葡萄球菌酶的毒理学研究 急性毒性 大鼠皮下注射的最大耐受剂量160000 U/kg。 小鼠尾静脉注射的LU/kg Beagle犬皮下注射的近似致死剂量32000 U/kg。 大鼠皮下注射rLysostaphin ，连续4周 在试验条件下，大鼠对rLysostaphin的无毒反应剂量为900U/kg。 兔皮下注射rLysostaphin ，连续4周 在试验条件下，兔对rLysostaphin的安全剂量大于18000 U/kg。 致畸敏感期大鼠皮下注射溶葡萄球菌酶，连续10天 ①中剂量组可见母体毒性，主要表现为孕鼠体重增长缓慢、粘膜出血。 ②高剂量组可见明显母体毒性及胚胎毒性，主要表现为孕鼠体重增长缓慢、粘膜出血、阴道流血、流产，死胎增多。 ③各剂量