基因沉默抑制子P1HCPro和P25在瞬时体系中的作用.pdfVIP

摘 要 转录后基因沉默(post-transcriptionalgene 降解过程。主要作用于同源性较高的转录产物，也称为RNA沉默(RNA silencing)。 并抑制入侵的外源DNA，具有维持基因组稳定表达的重要功能，也是植物抵御病毒入 侵的主要途径。与此对应，对病毒侵染过程的研究发现，一些植物病毒也能够编码特定 的蛋白质来抑制植物的基因沉默反应，即通过对PTGS抑制来对抗植物病毒的防御系统。 基因沉默抑制子P1／HC．Pro包括烟草蚀刻病毒基因组RNA编码蛋白P1的5’，端区域， 芜菁花叶病毒编码)编码序列的单独表达也足够抑制由病毒介导的基因沉默 (vinm-indueed gene virus 沉默抑制子P25是马铃薯X病毒(potato 基因沉默的信号阶段，这一阶段包括基因信号的产生，传递和由信号介导的基因沉默。 的病毒抑制子。对这些抑制子的研究，将有助于加深人们对真核生物基因表达的理解， 还可以丰富基因工程的研究理论。 benthamiana(1ine 元载体的瞬时沉默系统和病毒载体诱导转录后基因沉默系统，并研究了基因沉默抑制子 P1／I壬C．Pro和P25在该体系的部分功能。 1．成功建立了基于双元载体的瞬时沉默体系。这套沉默系统相对于病毒侵染法而言 具有快速而且不受实验材料限制的特点，相对于基因枪轰击法而言具有更节约实验成本 的特点。因此这套沉默可以用作其他基因沉默抑制子的鉴定和基因功能的研究。 异源蛋白在植物体内表达的研究提供了一个新的策略，即基因沉默抑制子与目的基因的 共表达，这对利用植物生物反应器表达重要经济价值的异源蛋白以便于进行商业化生产 具有重要意义。 于rbeS基因沉默的检测。本论文提到的多克隆抗体的制备方法具有省时、成本低、特 异性强等特点。 4．建立和优化了病毒诱导转录后基因沉默系统，确定了病毒诱导基因沉默瞬时表达 体系中烟草最佳侵染时期为4叶期和用于侵染的重组农杆菌的浓度为OD值为0．6-1．5。 5．P25并不能影响GFP转基因位点的甲基化，说明P25虽然作用于基因沉默的信号阶 不在RNA介导的DNA甲基化中起作用。 6．P25蛋白位于洋葱表皮细胞的细胞核和细胞质，说明P25位于洋葱表皮细胞的细胞 核和细胞质是与基因沉默信号可以在细胞质核细胞质之间传递相对应，这也从侧面证明 了P25作用于基因沉默的信号阶段。 定位 lI Abstract anucleotide of Post-transcriptionalgenesilencing(PTGS)issequence—specificprocess RNA leadstothe of RNAfrom degradation．It degradationhomologousamongendogenous or viruses．RNAoccursina谢de RNA of genes．transgenes silencing varietyorganism, interference,RNAi)andfungi(RNA includingplants(cosuppression)，animals(RNA an conserveddefense that represents mechanism quelling)．RNAsilencing evolutionar