基因工程菌酶法合成核苷类抗癌新药6甲基嘌呤2脱氧核苷.pdfVIP

基因工程茵酶法合成抗癌新药6一甲基嚷呤一2’一脱氧核苷 高彤 作为潜在的抗癌候选药物正受到越来越多的关注。MePdR本身是无毒的药物前 nucleoside 体，可被大肠杆菌(Escherichiaco』』)的嘌呤核苷磷酸化酶(purine 制RNA和蛋白质合成，导致细胞死亡；哺乳动物来源的PNP则不能分解BePdR。 eoJi coli 向肿瘤细胞转入E PNP基因并使之表达，当药物前体MePdR存在时，E PNP会把它分解成有毒的MeP从而高效杀伤肿瘤细胞。细胞中产生的MeP可以经 膜上的载体扩散至周围细胞中，能够产生高水平的旁观者效应。由于MePdR可以 杀伤非增殖期的肿瘤细胞，它被认为是治疗恶性实体瘤(如神经胶质瘤、肝癌、 胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌等)的优秀候选药物。该药物在肿瘤治疗中 有很好的应用前景。国内未见生产。 核苷类药物的传统生产手段是通过化学方法合成，但产率低，对人体及环境 成AraA开始，生物酶法以其工艺简单、立体专一性好的特点被应用于多种核苷的 生产，例如利巴韦林、双脱氧腺苷、5一氟尿苷等。而近年来基因工程技术的发展 则为提高酶法合成的效率提供了新的途径。 co]i 本课题首次报道以基因工程重组E PNP作为酶源，6一甲基嘌呤和脱氧 尿苷为底物合成MePdR的方法。在15mmol／L6-甲基嘌呤，60mmol／L脱氧尿苷， 40mmol／L pH7．0的磷酸盐缓冲液中，2％菌体在55℃下反应2h，转化率可达 83．78％。该方法有菌体用量少、反应时间短、转化率高的特点。反应液经硅胶制 备薄层提纯得到收率76．4％，纯度为99．3％的白色针状晶体，经1H核磁共振鉴定 该产品为MePdR。 关键词嘌呤核苷磷酸化酶；工程菌；酶法合成；6一甲基嘌呤一2’一脱氧核苷 基固工程茵酶法合成抗癌新药6一甲基嘌呤一2’一脱氧核苷 高彤 6-Methylpurine一2-deoxyriboside(MePdR)hasextraordinarystrongpotentials asananticancer nucleoside EscherichiacoliCall drugpurine phosphorylase(PNP)of human’Scan of into not，the MePdR catalyze，while cleavage aproduct high toboth and cancer performingtoxicity proliferatingnon-proliferating cells RNAand a anticancer byinhibiting protein’Ssynthesis．Thissuggestspossible ceilstransfectedwithE．coliPNP willliberate tumor genetherapystrategy，for genes toxicMePandbe fromthe kilied．Furthermore，MePreleased ceilsCanenter nearby cellsviat