抗黄曲霉毒素Blt1gt多克隆抗体的制备与微球偶联技术的研究.pdfVIP

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2018-03-30 发布于福建
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抗黄曲霉毒素Blt1gt多克隆抗体的制备与微球偶联技术的研究.pdf

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摘要本实验通过制备AFBl免疫抗原，免疫动物获得了多克隆抗体，将制备出的抗体与合适的微球载体化学偶联，得到AFBl免疫亲和微球。采用耻Lc法检测偶联反应对抗体活性的影响。主要的研究内容及结果如下：免疫抗原。通过对不同反应温度AFBl利用率的考察，结果表明了50℃时最大，为39．3％，产物中AFBl与BsA的摩尔比最大为10．68：1。 (2)分别采用从sigma公司购买的抗原和自制的抗原免疫日本大耳白兔，获的抗原免疫Balb／c小鼠，效价最高为l：8000。 (3)采用碳化二亚胺法偶联抗体与硅胶微球，研究了抗体与微球偶联条件的影响。结果表明最适偶联pH值为pH6．0～6．2，最佳EDC用量为30删g幢微球，最适反应时间为17～20h，抗体的最大偶联效率为72．2％。 (4)采用高效液相色谱柱前衍生法检测偶联反应对抗体活性的影响。结果表明，抗体连接微球后，可以很好的结合小于等于20ng，mL的AFBl，且各浓度间线性关系良好，相关系数R=0．9978。对偶联微球后的抗体稳定性进行了研究，结果表明180天内抗体对AFBI的结合能力保持稳定。关键词：黄曲霉毒素Bl，抗原，多克隆抗体，微球，化学偶联 Abstract were anjmalsused byiImnuning sylltllesized P01yclonal跗tibodiesproduced immune iIlthis itwas with to AFBl coupledmicrosphere alltigen eXperiment．Then the synmesizelli曲perf．ormanceAFBl胡沁itymicrospherc．catcllingc印abil时of antibodies was AFBl measuredby耻LC．Furthcrmore，thestabili够of against amibodieswasstLldied．MainresearchcomentsandrcsuItsasfollo、vs： M眦dchreactionunder (1)hmune姐tigen(心Bl—BSA)wassyntllesizedby difrerentreaction resultlmsiIldicatedtllat50℃isthe temperatures．The optim啪 ratioof was ratioof iIl ternpcr殉】re，utilizationAFBl 39_3％，molarAFBl：BSA lO．68：1． productwaS of and of were imo (2)AntigenSigmaconⅥ)anyaIltigensyn畦lesizediI巧ected tworabbitS ELISAtitcrwas1：32000and1： respectively，obt血趾tisemm也at of intoBalb／c titerwasat 30000．AntigenSigInaCompa玎y、v嬲蜘ectedmice，EL