检测拟南芥CDPK基因家族表达的cDNA阵列和RTPCR方法的建立.pdfVIP

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2018-03-30 发布于福建
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检测拟南芥CDPK基因家族表达的cDNA阵列和RTPCR方法的建立.pdf

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中文摘要中文摘要在植物细胞穰母转导过程中，缎胞质内的游离钙作为臆内纂=信使有重要匏生理调控功能。但钙离子通过何种机制实现其调节细胞生理活动的功能，即胞质钙离子水平变化的下淤律瑶瓤割为嚣，基蔫迸不涛楚。纛探讨钙僖整下游砟鬻租翱豹蓄要阏踅是臻骥钙离予作用的靶分子及其确切的生理调节功能。由于钙依赖性蛋白激酶(Calcium．Dependent Protoin Kinases，CDPK)是植物纲臆中特有的一类矗接依藏钙激滚豹蛋白激酶，所以推测 CDPK可能作为钙信使的靶分子而参与一些植物细胞内钙信使的下游作用途径。根据对拟 protein 势了较全面雉研究拟南芥中存在的42种钙依赖性蛋白激酶(34种CPKs和8种C砌矗) 所分别具有的可能功能，首先必须建立有效的检测这些蛋白激酶表达及其变化的方法。本论文工作根攒拟南莽基因组数据库所绐出的34个CPK和8个CRK序列，分别尝试建立了 42种钙依赖性蛋白激酶韵eDNA阵列和RT-PCR检测方法。对eDNA阵列方法的杂交特异性分析表明，当被检序列与探针序列的同源性达到82％时，其杂交信号强度约是撩针与其自身杂交信号强度的30％。在42秘被检序捌中，仪有两个序列的同澡性在80％以土，其余绝太多数序耐之闯的同源性都在70％以下域更低。结果表明，本工作建立的eDNA阵列方法蠢较好的特异性，能够满足实验的要求。同时，采用RT-PCR方法对拟南芬CDPK基因家族在正常或渗透胁迫条件下的袭达进行丁定性分析，初步观测到拟南芥植株中有超过三分之二的C糙￡基嚣窝CRK基因孬在一定程度的表达。撼说弱RToPCR蠢法适臻于褒究拟南芥CDPK基因家族的低丰度表达。这些方法的摸索和尝试为j{6一步探讨CDPK在植物细胞穗号转导中的捧艏机制奠定了纂础。关键谢：钙依赖性蛋白激酶，拟南芥，eDNA阵列，RT-PCR 茎苎塑要 ABSTRACT inanumberof Fmo a second roles important Ca2+，askey messenger’plays cytoplasmic molecular downstream in detailed transduction cells．However,the signal pathwaysplant unclearAnumberof itseffectsromaln whichcalciumexerts mechanisms by in been identified kinas∞(CDPKs)have higher calcium．．dependentprotein experimentally