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极地海洋沉积放线菌分离培养与筛选 摘要 海洋沉积物是营养较为丰富的微生物栖息地，蕴涵着丰富独特的海洋微生物 资源，特别是以能产生多样的次级代谢产物而著称的放线菌。研究海洋沉积放线 菌，不但可以发现新的放线菌资源，同时也可以发现新型活性产物，如抗病毒、 抗肿瘤的新抗生素、海洋生物毒素、酶类、抗心血管病化合物、酶类抑制剂、生 物功能材料等在医药、食品、化工、环保及其它各行业上具有重要价值的活性物 质。 rDINA对 本研究对两极地区8份海洋沉积物进行放线菌的分离培养，通过16S 分离菌株进行鉴定，并对分离鉴定得到的放线菌株进行生态条件的研究和次生代 谢基因及抗菌活性的筛选。 通过稀释平板法和ARDRA及16SrDINA序列测定技术，从极地海洋8份沉积 样品中共分离到22个灿mRA分型的85株放线茵，分别属于赖氏菌属(k必D门妇)、 来自南极普里兹湾潮间带的ZS314与最近菌株序列相似度低于97％，可能为微杆 各沉积物中放线菌多样性有所不同，其中从南极海洋沉积物中分离到的放线 菌以赖氏菌和红球菌为主，而北极海洋沉积放线菌中赖氏菌和盐细菌比较多。而 各沉积物中放线菌分离情况也有很大差别，分离自南极中山站海区潮间带样品ZS3 的放线菌株，无论是在数量还是多样性上，都是最多的，共分离到4个属的38株 放线菌，其放线菌分离率高达63．33％，而从北极新奥尔松地区的沉积样品KS6中 放线菌分离情况最差，只分离到2株放线菌，放线菌分离率只有20％。 采用不同培养基对沉积物进行放线菌分离培养的研究中发现，ISP3培养基、 第l页 ISP5培养基和无机盐琼脂培养基，分离培养获得的菌落数目、种类都较多，经鉴 定后获得的放线菌株数量也较多，放线菌分离率比较高(均大于60％)，是较为理 想的海洋沉积放线菌培养基。 所有测试放线菌株在海水培养基中的生长情况均优于去离子水培养基，最大 的培养基中无法生长，表现出对盐的需求，是严格意义上的海洋放线菌。所有测 试菌株在O℃均能生长，其中大多数最适生长温度在15～25℃之间，为耐冷菌。最 适pH在7．8之间，在pH4下均不生长，多数在pHlO下可以生长，为耐碱性菌株。 成酶)基因进行扩增，共筛选到72株具有PKS和／或NI冲S基因的菌株。其中具 NI冲S基因的菌株有68株。有25株阳性菌株同时含有两种基因，而从3株红球菌 有价值的代谢产物。以枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌 为指示菌对放线菌株进行抗菌活性筛选，结果未筛选到活性菌株，有必要优化实 验方法和条件对其活性进行进一步研究。 关键词：极地，海洋沉积物，放线菌，16srDNA，抗菌活性 第1l页 Isolat：ionand of f．rom actinobacteria screening polar marinesediments ABSTRACT M撕ne sedimentsarenutrient莉chmicrobialhabitatS abulldallt contaj血ng ullique m撕ne actinobaucteriaWIlicharef．锄ousfortlleirabilitiesto Injcroo瑁疵sms，eXpecially allkindsof wit量lbioactivities． produce compolulds Inmis s嘶i11swereis01ated舶msedimentsof