利用蛋白质免疫印迹标准化实现相对定量-ThermoFisherScientific.PDFVIP

技术说明 iBright 智能成像系统 利用蛋白质免疫印迹标准化 实现相对定量 简介 应干扰靶点的检测 (如分子量相当) 。在开始标准化前，必须先 将蛋白质免疫印迹与先进的数字成像相结合，已成为一种功能 评估管家蛋白的定量准确性和动态范围，然后再进行蛋白质 强大的检测蛋白质丰度和蛋白质修饰的工具。使用最新的成像 免疫印迹标准化。获取的管家蛋白信号应在较宽的浓度范围 软件和高敏度灵的仪器，现已可以更轻松地实现蛋白质免疫印 内保持线性，这样方可作为可靠的标准化参照。 迹相对定量。 先决条件1：确定连续稀释的管家蛋白的线性范围 标准化是获得可靠且可重复的定量蛋白质免疫印迹结果的 使用内部上样对照的关键是确保其在线性范围内，可理解为 关键步骤。在理想状态下无需进行标准化，但诸如上样和转 在膜上的蛋白质数量与信号强度呈线性关系的信号强度范围 印效率等因素的存在，使得标准化成为蛋白质免疫印迹的基 内。可使用连续稀释的细胞或组织提取物，评估管家蛋白的线 本步骤。本技术说明提供了使用内参蛋白进行标准化的基本 性范围。 原理，并介绍了如何准确地进行蛋白质免疫印迹标准化，以 获取有意义且可重复的数据。本文中的所有成像数据均采用 ™ ™ Invitrogen iBright FL1000成像系统完成。 使用管家蛋白 (也称内参蛋白、内部上样对照) 进行标准化 使用管家蛋白是蛋白质免疫印迹标准化实验的一个重要组 成。由于各种原因，并非全部管家蛋白均可用于所有生物学检 测系统中的标准化研究。管家蛋白的选择主要取决于目的蛋 白。例如，如果使用化学发光或单色荧光系统，则管家蛋白不 例如，使用2倍连续稀释的HeLa 细胞提取物(起始材料为 1:2,500 As an example, the usability and linear range of fi ve Cyclophilin B 25,000 y t i 20,000 s common housekeeping proteins (β-tubulin, cyclophilin B, 1:2,500 50 μg裂解液)检测5种常见的管家蛋白( β-tubulin、cyclophilin 15 sec n 25,000 e 15,000