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目 录 1 前言 6 1.1 脂肪酶的概述 6 1.1.1 脂肪酶的介绍 6 1.1.2脂肪酶的结构特征 6 1.1.3 脂肪酶的应用 7 1.1.4 扩展青霉脂肪酶 7 1.2 非水溶剂概述 8 1.2.1 有机溶剂 8 1.2.2 离子液体 8 1.3 生物柴油概述 9 1.3.1生物柴油的介绍 9 1.3.2生物柴油的制备的常用方法及优劣 9 1.4 本文的研究内容与创新之处 9 2 材料和方法 10 2.1 材料 10 2.1.1 仪器设备 10 2.1.2 实验材料及试剂 11 2.2 方法 11 2.2.1 扩展青霉脂肪酶活性与稳定性的探究 11 底物丁酸乙烯酯的波长扫描 11 摩尔吸光系数的测定 11 不同酶量对酶活性的影响 11 不同底物浓度对酶活性的影响 12 不同温度对酶活性的影响 12 不同有机反应溶剂对酶活性的影响 12 不同有机溶剂对酶稳定性的影响 12 2.2.2扩展青霉脂肪酶催化生物柴油的制备 13 叔丁醇做为反应溶剂制备生物柴油 13 以离子液体[BMIM][PF6]为反应溶剂 13 3 结果与讨论 13 3.1扩展青霉脂肪酶活性与稳定性的探究 13 3.1.1底物丁酸乙烯酯的波长扫描 13 3.1.2摩尔吸光系数的测定 14 3.1.3不同酶量对酶活性的影响 15 3.1.4不同底物浓度对酶活性的影响 16 3.1.5不同温度在有机溶剂反应中对酶活性的影响 17 3.1.6不同有机反应溶剂反应下对酶活的影响 18 3.1.7不同有机溶剂对酶稳定性的影响 19 3.2扩展青霉脂肪酶催化生物柴油的制备 20 4 结论 22 【参考文献】 23 致谢 24 _Toc291449792 【Keywords】 25 扩展青霉碱性脂肪酶在非水介质中活性和稳定性的检测 【摘要】本实验通过酶在非水介质中进行反应，检测扩展青霉脂肪酶（Penicillium expansum Lipase，PEL）的活性和稳定性。通过不同的反应酶量，不同的反应温度， 不同的反应底物浓度测量反应进行的速率，以此反应酶的活性；通过酶在不同的有机溶剂中进行反应，测得反应速率，以此来检测酶的活性和稳定性,此后又尝试测试水黄皮种子提取的油经过在有机溶剂和离子溶剂的反应体系下与甲醇进行脂交换反应，生成生物柴油，并检测出生物柴油的产率。实验得出，扩展青霉碱性脂肪酶在10 ml的反应体系下，酶量400 mg，反应底物浓度均为20 mM，温度45 ℃的条件下反应速率为最大，活性最好，在有机溶剂为正庚烷的条件下活性最好；在稳定性试验测试中显示，在有机溶剂环己烷中经过预处理的酶只丧失很少的活性，保留的活性为96.2264 %。利用该酶对水黄皮种子中提取的油与甲醇进行转酯化反应生成生物柴油，得出生物柴油的产率为34.456 %，看出水黄皮种子在生物柴油生产方向有一定的研究潜力。 【关键词】扩展青霉碱性脂肪酶,非水介质，生物柴油 1 前言 1.1 脂肪酶的概述 1.1.1 脂肪酶的介绍 脂肪酶广泛的存在于动植物和微生物中。植物中含脂肪酶较多的是油料作物的种子，如蓖麻籽、油菜籽，当油料种子发芽时，脂肪酶能与其他的酶协同发挥作用催化分解油脂类物质生成糖类，提供种子生根发芽所必需的养料和能量；动物体内含脂肪酶较多的是高等动物的胰脏和脂肪组织，在肠液中含有少量的脂肪酶，用于补充胰脂肪酶对脂肪消化的不足，在肉食动物的胃液中含有少量的丁酸甘油酯酶。在动物体内，各类脂肪酶控制着消化、吸收、脂肪重建和脂蛋白代谢等过程；细菌、真菌和酵母中的脂肪酶含量更为丰富(Pandey等)。由于微生物种类多、繁殖快、易发生遗传变异，具有比动植物更广的作用p H、作用温度范围以及底物专一性，且微生物来源的脂肪酶一般都是分泌性的胞外酶，适合于工业化大生产和获得高纯度样品，因此微生物脂肪酶是工业用脂肪酶的重要来源，并且在理论研究方面也具有重要的意义。 1.1.2脂肪酶的结构特征 研究表明，来源不同的脂肪酶，其氨基酸组成数目从270～64不等，其分子量为29000～100000，多数脂肪酶都是单链蛋白，尽管不同来源的脂肪酶（EC）具有不同的氨基酸组成（残基数目，分子量，三维空间结构等），但由于生物的同源性和进化过程的保守性，其催化中心拥有相似或相同的特征区：His- X- Y-Gly-Z- Ser-W- Gly 或Y- Gly- His- Ser-W- Gly (X、Y、W、Z 是指非特异氨基酸残基)。绝大多数脂肪酶的活性中心都是由Ser和His参与组成，Ser、His与另一种氨基酸残基（如CCL何GCL的Glu、RML和hPL的Asp等）一起构成脂肪酶催化活性中心的三元组（如图1）。 图1 脂肪酶二级结构的一般形式 脂肪酶是一种“丝氨酸水解酶”，构成脂肪酶活