电穿孔介导小干扰rna高效转染小鼠附植前胚胎.pdf

常博皞 等/ 电穿孔介导小干扰RNA 高效转染小鼠附植前胚胎 613 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology May 25, 2012, 28(5): 613−622 /cjbcn ©2012 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 RNA 常博皞，彭辉，田进海，苏建民，张亨德，白学尧，张涌 西北农林科技大学动物医学院 农业部生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100 常博皞, 彭辉, 田进海, 等. 电穿孔介导小干扰RNA 高效转染小鼠附植前胚胎. 生物工程学报, 2012, 28(5): 613−622. Chang BH, Peng H, Tian JH, et al. Efficient delivery of siRNA into mouse preimplantation embryos by electroporation. Chin J Biotech, 2012, 28(5): 613−622. 摘 要: 使用 Cy3 标记的阴性对照小干扰 RNA (siRNA) 转染小鼠附植前胚胎，建立向小鼠附植前胚胎导入 siRNA 的电穿孔方法。通过控制透明带弱化程度、电压、脉冲时间和脉冲次数等条件，采用不同参数组合并结 合使用不同介质作为电转缓冲液将 Cy3 标记的阴性对照 siRNA 转染小鼠附植前胚胎。在荧光倒置显微镜下， 观察胚胎的存活率、siRNA 转染率以及阳性转染存活胚胎的囊胚发育率。结果显示小鼠附植前胚胎在使用台氏 液消化胚胎透明带 10 s 后，以opti-MEM 作为电转缓冲液，电穿孔参数设置为30 V ，1 ms，3 次的条件下取得 最佳转染效果。总之，电穿孔方法可实现siRNA 简便、高效地转染小鼠附植前胚胎。 关键词: 小干扰RNA ，电穿孔，透明带，RNA 干扰 Efficient delivery of siRNA into mouse preimplantation embryos by electroporation Bohao Chang, Hui Peng, Jinhai Tian, Jianmin Su, Hengde Zhang, Xueyao Bai, and Yong Zhang Key Laboratory of Animal Biotechnology, Ministry of Agriculture , College of Veterinary Medicine, Northwest AF University, Yangling 712100, Shaanxi, China Abstract: We developed a detailed electroporation method to deliver efficiently siRNA into mouse preimplantation embryos. By introducing Cy3 labeled negative control small interfering RNA (siRNA) into mouse preimplantation embryos, we optimized conditions for the electroporation, including the voltage, pulse duration, pulse number, electroporation buffer and an important step to weaken the zona pellucida. Embryonic survival rate, transfection rate and Received: October 9, 2011; Accep