高二新人教版选修3生物基因工程概述教案.docVIP

第1节 基因工程概述 【学习目标】 1、说出基因工程的概念（A） 2、简述基因工程的诞生历程（A） 3、说出DNA重组技术所需的三种基因工具的作用（A） 4、简述基因工程基本操作程序的四个步骤（B） 【基础梳理】 一、基因工程的概念 是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类所需的基因产物的技术。 （1）操作环境：生物体外 （2）操作对象：基因 （3）操作水平：DNA分子水平 （4）基本过程：剪切→拼接→导入→表达 （5）结果：人类需要的基因产物 二、基因工程的工具及作用 （一）限制性核酸内切酶（简称限制酶） “分子手术刀” 1、来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 2、作用：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两 个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 3、特点:具有专一性，表现在两个方面： ①识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列。 ②切割特定序列中的特定位点。 4、结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 例1、下列有关基因工程中限制内切酶的描述，错误的是（ ） A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B．限制性内切酶的活性受温度的影响 C．限制性内切酶能别和切割RNA D．限制性内切酶可从原核生物中提取 （二）DNA连接酶 “分子针线” 1、分类：根据酶的来源不同，可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类 2、作用：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 【疑难解析】 1、两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： （1）相同点：都缝合磷酸二酯键 （2）区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶来源于T4噬菌体能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。 2、DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 不同点 连接的DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质 (三) 载体 “分子运输车” 1、载体的作用：载体是基因运输工具，在基因操作过程中，使用载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因送到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 2、载体必须具备三个条件： （1）能在受体细胞中复制并稳定保存。 （2）具有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入。 （3）具有某些标记基因，以便进行筛选。 3、载体的种类： 质粒 、 噬菌体 和 动、植物病毒 等。 最早应用最常应用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。 三、基因工程的基本过程 (一) 获得目的基因（目的基因的获取） 1、获取方法主要有两种：（1）从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。 （2）用人工的方法合成。 ★获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。 ★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 2、利用PCR技术扩增目的基因 （1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2）目的：获取大量的目的基因 （3）原理：DNA双链复制 （4）过程：第一步：加热至90～95℃ DNA解链为单链； 第二步：冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。 （5）特点：指数形式扩增 (二) 制备重组DNA分子（基因表达载体的构建） 1、重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有标记基因。 ★标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 2、方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。 (三) 转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞） 1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2、常用的转化方法： （1）将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌介导转化技术（农杆菌转化法），其次还 基因枪介导转化技术（基因枪法）和花粉管通道技术（花粉管通道法）。 （2）将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。 （3）将目的基因导入微生物细胞：Ca2＋处理法。 例2、以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。 （1）