荧光显微镜原理一-中国试剂网.PDF

中国试剂网 6.3.1.5 荧光显微镜原理 一、荧光显微镜 荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学 系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜 系统放大以观察标本的荧光图像（图 3-15 ）。 （一）光源 现在多采用 200W 的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形， 内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升 高，当水银完全蒸发时，可达 50～70 个标准大气压力，这一过程一般约需 5～ 15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射 光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为 荧光显微镜普遍采用。 超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境 温度不宜太高。 新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一些时间后，则需要 高压启动（约为 15000V），启动后，维持工作电压一般为 50～60V，工作电流约 4A 左右。200W 超高压汞灯的平均寿命，在每次使用 2h 的情况下约为200h ，开 动一次工作时间愈短，则寿命愈短，如开一次只工作 20min ，则寿命降低 50% 。 因此，使用时尽量减少启动次数。灯泡在使用过程中，其光效是逐渐降低的。灯 熄灭后要等待冷却才能重新启动。点燃灯泡后不可立即关闭，以免水银蒸发不完 全而损坏电极，一般需要等 15min。由于超高压汞灯压力很高，紫外线强烈，因 此灯泡必须置灯室中方可点燃，以免伤害眼睛和发生爆炸时造成操作。 超高压汞灯（100W 或 200W ）光源的电路和包括变压、镇流、启动几个部 分。在灯室上有调节 灯泡发光中心的系统，灯泡球部后面安装有镀铝的凹面反 射镜，前面安装有集光透镜。 国产超高压汞灯 GCQ-200 型性能良好，可以代替HBO-200 等型的进口灯泡， 平均寿命在 200h 以上，价格也比较低。 我国研制的一种简易轻便型高色温溴钨荧光光源装置，体积小，重量轻，功 中国试剂网 6.3.1.5 率小，交、直流两用（自带直流电源），易于携带，使用方便，已推广应用。 （二）滤色系统 滤色系统是荧光显微镜的重要部位，由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号， 各厂家名称常不统一。滤板一般都以基本色调命名，前面字母代表色调，后面字 母代表玻璃，数字代表型号特点。如德国产品（Schott）BG12 ，就是种蓝色玻璃， B 是蓝色的第一个字母，G 是玻璃的第一个字母；我国产品的名称已统一用拼音 字母表示，如相当于 BG12 的蓝色滤板名为 QB24，Q 是青色（蓝色）拼音的第 一个字母，B 是玻璃拼音的第一个字母。不过有的滤板也可以透光分界滤长命名， 如 K530 ，就是表示压制滤长 530nm 以下的光而透过530nm 以上的光。还有的厂 家的滤板完全以数字命名，如美国 Corning 厂的 NO ：5-58，即相当于BG12 。 用于荧光显微镜的主要滤板如表 3-1 。 表 3-1 荧光显微镜常用滤板型号和透光特点 相应名称 2mm 厚透光范围 基本色调 上海电器元件 德国（Schott ）苏联 日本 （峰值）nm 厂 黑紫 ZWB-1 UG-1 yΦC-2 DV-1 300～400 （365 ） 黑紫 ZWB-2 UG-5 yΦC-1 280～240 （360 ） 靛蓝 ZB-2 BG-1 ΦC-1 BG-1 300～500 （380 ） 靛蓝 ZB-3 BG-3