根尖压片的制作.PDFVIP

64實驗活動 28. 根尖壓片的製作 利用洋蔥(Allium)製作根尖壓片，可研究有絲分 裂的各個階段。 洋蔥根尖的製備 1. 選擇一個較大完整的洋蔥鱗莖。 2. 用水洗刷，除去舊根及泥粒。 3. 選一大小適中的玻璃瓶盛載清水，將洋蔥 放於瓶上，使其底部浸於水中。 4. 每天換水兩次。 5. 當不定根長至 2-3 cm 時，剪取前端 1-2 cm ，浸於盛有新鮮固定液(例如醋酸酒 精)的瓶子內。 6. 將瓶搖勻，以相同分量的轉換新鮮固定液 轉換原來的固液定，置於室內二十四至四 十八小時。 7. 倒去固定液，加入 70% 乙醇於瓶內，並加 以搖勻。 8. 以 70%乙醇置換原來的，重覆兩次。 9. 處理後之根尖可作製造壓片之用。 註 1. 洋蔥鱗莖在溫度太和暖時，例如夏天，可 能不會發芽。 2. 洋蔥細胞的有絲分裂活動於下午一至二時 及晚上十一時至午夜達至最高峰，所以應 在接近中午時剪取根尖端。 3. 若不打算立即使用，應存放於冰箱內。經 固定之根尖於低溫下可保存二至三月。 實驗活動65 根尖壓片製作的步驟 1. 把一根尖放在一清潔的玻片上，然後剪下 前端 1-3 mm ，棄去其餘部分。 2. 在玻片上加一滴醋酸地衣紅染劑，用鑷子 把根尖頂點放在染劑中內。 3. 用一扁頭針及解剖刀，將根端撕成若干碎 片。 4. 將碎片壓成漿狀，若有需要，可加多一滴 染劑，應需避免過多。 5. 將黏附在扁頭針及解剖刀上的染劑掃回玻 片上，以免損失玻片上的根細胞物質。 6. 將蓋玻片放置於已壓碎成漿之根細胞上， 用力切勿過 用鉛筆頂上擦膠或解剖針的木柄輕輕壓 猛以致壓破玻片。 下，使根細胞平均地散佈於玻片上，勿讓 蓋玻片移動。 輕輕壓平細 7. 將玻片放於一盛有沸水之燒杯上或電熱板 胞時，切勿移動蓋玻 上加熱，直至蓋玻片邊之染劑開始乾涸。 片，否則會損壞根細 8. 將玻片移離燒杯，然後將之放在一疊吸水 胞。 紙中將細胞再度壓平，這樣可吸去蓋玻片 的多餘染劑，並使分裂中之細胞之染色體 平展開來。 9. 玻片若不密封只可保存三十分鐘，不久便 會變壞，若用指甲油加以密封則可多保留 二至三天，存放後原來的染色會加深。 10. 進行觀察時，需用適當的光源，而用綠光 最為有效。上佳的根尖壓片，可用油鏡觀 察。 66實驗活動 註 1. 上述方法毋需將新鮮材料作長時間的固 定。另一方法則將材料放在卡諾依氏固定 劑(Carnoy’s fixative)中二十四小時，已固定 的材料再放入氫氯酸＋醋酸間苯二酚藍染 劑中，加熱五分鐘以作染色。氫氯酸的作 用是把組織浸離，使染劑較易滲入。若使 用未經固定的材料來製備根尖壓片，染色 體會膨脹而呈現疏鬆狀，其體積增大，甚 至數目有時也會好像變成雙倍。教師在解 釋這個現象時，需多加留意。 製備試劑 1. 醋酸酒精 將一份冰醋酸和三份無水乙醇混和，便可製成醋酸酒精。在使用前將 以上兩種化學藥品混合。 2. 醋酸地衣紅染劑(1% 溶液溶於 45% 醋酸中) 將 1 g 地衣紅加入燒瓶中。 3 加入約 55 cm 沸水將染料溶解。