精氨酸酶和化疗药物联合使用对鳞状细胞肺癌的-香港防癌会.PDFVIP

香港防癌會研究資助：2017 年度報告 研究標題：精氨酸酶和化療藥物聯合使用對鱗狀細胞肺癌的治療研究（體 內與體外研究） 研究者及單位： 主要研究者：林詩鈞博士，哲學博士，博士後，香港大學內科學系。 合作研究者：何重文醫生，醫學博士，英國倫敦皇家內科醫學院榮授院士， 臨床副教授，香港大學內科學系。 香港防癌會研究資助批准日期：2016 年2 月4 日 研究開始日期：2016 年4 月1 日 研究年期：1 年 報告和中期結果 我們在原本的研究提案中所列的研究目的包括以下的研究：  精氨酸酶在鱗狀細胞肺癌中的體外活性。  精氨酸酶和化療藥物（紫杉醇，吉西他濱和順鉑）在鱗狀細胞肺癌 的協同效應 （體外活性）。  精氨酸酶或與化療藥物組合對鱗狀細胞肺癌中的作用機制。  精氨酸酶或與化療藥物組合對鱗狀細胞肺癌裸鼠移植瘤的體內活性。 在過去一年，我們完成了鱗狀細胞肺癌細胞系體外活性和兩個鱗狀細胞肺 癌裸鼠移植瘤的實驗。簡而言之，我們已經證實聚乙二醇化精氨酸酶 1 （BCT-100 ）在鱗狀細胞肺癌細胞和其中一個裸鼠移植瘤具有良好的抗癌 活性。以下是我們詳細的結果報告。 精氨酸酶在鱗狀細胞肺癌的體外活性 我們使用了 3 條鱗狀細胞肺癌細胞系（SK-MES-1 ，H520 和 H2170 ）。 BCT-100 抑制鱗狀細胞肺癌細胞系的生長 ，通過噻唑藍 （MTT ）細胞活力 測試所測定的IC50 值分別為13.7 ± 0.6 ，14.0 ± 0.8 和14.5 ± 0.3 毫單位/毫升 （圖1）。 精氨酸酶與化療藥物（紫杉醇，吉西他濱和順鉑）在鱗狀細胞肺癌的協同 效應(體外) 我們研究了不同化學治療藥物（紫杉醇，吉西他濱和順鉑）與 BCT-100 的 協同效應。然而，幾乎所有細胞系中的不同組合均沒有協同效應（圖 2 ）。 最後，我們決定集中研究BCT-100 單獨使用對鱗狀細胞肺癌的影響。 BCT-100 對細胞生長抑制的機制 （體外） 精氨基琥珀酸合成酶（ASS1 ）和鳥氨酸轉氨甲醯酶（OTC ）是尿素循環中 的關鍵酶，負責補充細胞內精氨酸儲存。我們在所有細胞系中檢測不到精 氨基琥珀酸合成酶和鳥氨酸轉氨甲醯酶的內源性表達（不顯示數據），表 明鱗狀細胞肺癌對精氨酸酶的潛在敏感性。 對所有細胞系，BCT-100 均沒有改變 B 淋巴细胞瘤-2 （Bcl-2 ）和生存素 （survivin ）的表達以及沒有把脱氧核糖核酸修複酶(PARP)和凋亡蛋白酶 （caspase-3 ）切割，表明不涉及凋亡（不顯示數據）。此外，所有細胞糸 都不能檢測到磷化蛋白激酶 B （pAKT ）和磷化细胞外調節蛋白激酶 （pErk ），也檢測不到BCT-100 對磷化蛋白激酶B 和磷化细胞外調節蛋白 激酶的下調（數據未顯示） ，似乎 BCT-100 對體外細胞生長的抑制作用不 是由細胞凋亡和對磷化蛋白激酶 B / 细胞外調節蛋白激酶途徑所導致。所 以，體外機制仍然未明。 BCT-100 對鱗狀細胞肺癌裸鼠移植瘤的作用(體內) 我們成功建立兩個鱗狀細胞肺癌裸鼠移植瘤模型 （以下簡稱 “移植瘤模 型”）（SK-MES-1 和 H520 ）。在不同組中裸鼠的最初腫瘤大小沒有顯著 差異（不顯示數據）。圖3 顯示了實驗期間對照組和BCT-100 治療組中的 相對腫瘤大小，BCT-100 （60 毫克/公斤）抑制SK-MES-1 移植瘤模型中的 腫瘤生長，但不能抑制 H520 移植瘤模型的腫瘤生長。在不同組中裸鼠的 體重並沒有差異證明BCT-100 治療並沒有毒性（p 0.05 ）（不顯示數據）。 我們通過蛋白質印跡法研究精氨基琥珀酸合成酶和鳥氨酸轉氨甲醯酶的內 源性表達，精氨基琥珀酸合成酶在 SK-MES-1 移植瘤模型中的表達高於 H520 移植瘤模型。兩種移植瘤模型的鳥氨酸轉氨甲醯酶水平均處於低水 準（圖 4 ）。由於在 H520 移植瘤模型中精氨基琥珀酸合成酶和鳥氨酸轉 氨甲醯酶 （尿素循環的耗盡的關鍵酶）表達都處於低水準，所以理論上它 對BCT-100 治療應當是敏感的。 內源性精氨酸酶 2 （Arginase 2 ）在肺癌病人組織中的表達比較高 ，然而， 精氨酸酶2 不抑制免疫系統 ，也不影響疾病發展（Rotondo et al., 2008 ）。 我們建議具有高內源性精氨酸酶 2 表達的移植瘤模型會比較適應低精氨