2010-712-血栓与止血检测进展.ppt

血栓与止血检测进展 王鸿利 上海交通大学医学院附属瑞金医院，上海血液学研究所，200025 近年，随着基础理论和实验技术的发展，血栓和止血检验及其临床应用也有了很大的进展，本文就此作一简述。 （一）血小板微颗粒检测 血小板被激活后，以出芽方式形成囊泡或以伪足断裂方式形成直径为0.1～1.0μm的血小板颗粒（Platelet Microparticle,PMP)。PMP的体积较正常血小板小，但有完整的血小板膜结构和功能。PMP膜上可表达多种血小板膜糖蛋白（GP）Ⅱb/Ⅲa（ GP Ⅱb/Ⅲa）、 GPⅠb/Ⅸ-Ⅴ、血小板活化因子（PAF）、β-样前体淀粉蛋白、Ca2+依赖性蛋白酶Calpainyi以及有促凝作用的磷脂等。因此检测血循环中的PMP可较完整地反映血小板参与血栓形成和血液凝固的功能。 〔检测方法〕流式细胞术。主要试剂为CD61 parcp:多甲藻素-叶绿素蛋白标记抗血小板GPⅢa的单克隆抗体 〔参考值〕66±17个/104血小板（山东大学齐鲁医院报道）。 〔临床意义〕PMP主要用于动脉血栓性疾病的检测，它是动脉血栓形成的敏感和特异的分子标志物。 1.急性冠脉综合征（ACS）：有证据显示，PMP参与动脉粥样硬化和血管再梗塞的病理过程。Cawaz等对急性心肌梗死（AMI）施行PTCA患者进行系列血小板功能研究，发现PTCA术后患者的血小板数因消耗增加而减少，PMP因大量形成而增多，后者又参与冠脉血栓的形成。Katopodis等对行冠脉血栓形成术的ACS患者进行观察，他们将血小板激活状态作为试验组（近期发生AMI、不稳定性心绞痛者），结果发现，试验组患者PMP水平较正常对照组明显增高。 2.脑血栓形成：对大血管血栓、小血管血栓、多发性脑梗死和阿尔茨海默病患者进行PMP检测。结果发现，阿尔茨海默病患者的PMP水平与正常对照组无统计学差异，而其他疾病组患者的PMP水平均显著高于正常对照组，且治疗后有明显的降低，而且小血管血栓组患者的PMP水平高于大血管血栓组患者。表明PMP水平的增高，主要反映小动脉的血栓形成和血栓阻塞。 （二）血小板-白细胞聚集体检测 血小板被激活后，血小板释放P-选择素（P-selectin或GMP-140）。 P-选择素与白细胞和（或）单核细胞膜上的P-选择素配体糖蛋白-1（PSLG-1）结合形成血小板-白细胞聚集物（Platelet-Leucocyte Aggre - gate,PLA)和（或）血小板-单核细胞聚集物 （ Platelet-Monocyte –Aggregate）。该聚集体是反映动脉血栓形成的特异性标志物之一。 〔检测方法〕流式细胞术。主要试剂为FTTC标记的鼠抗人GPIb（CD42b）单克隆抗体，藻红蛋白标记的抗人白细胞CD45单克隆抗体，FTTC标记的鼠抗人P-selectin （CD62b）单克隆抗体。 〔参考值〕瑞典学者报道血小板-白细胞聚集物为15.3±8.5％（PLA/L）。 〔临床意义〕动物实验和临床研究表明，PLA是更敏感和更特异的血栓标志物。一组93例胸痛患者，其中9例为AMI患者，其血小板-单核细胞聚集物为34.2±10.3％，84 例非AMI胸痛患者的血小板-单核细胞聚集体为19.3±1.4％，二组差异显著（Ｐ＜0.05）； AMI胸痛组和非AMI胸痛组患者的血小板-单核细胞聚集物水平均较10例正常对照组的血小板-单核细胞聚集物水平为高（Ｐ＜0.001）。 （三）血管性血友病因子裂解蛋白酶活性检测 生理情况下，由血管内皮细胞合成的血管性血友病因子（von Willebrand Factor, vWF）主要受vWF裂解蛋白酶（ vWF C-leaving Proteinase, vWF -CP）的调节。vWF –CP作用于 vWF分子量为250000多聚体的Try（842）-Met（843）之间的肽键，将它们水解成分子量为176000和140000的两个小分子肽段。此时vWF不能过度地参与血小板的粘附和聚集，因此vWF –CP是 限制血栓形成的标志物之一。 〔检测方法〕ELISA。以Ⅲ型胶原包被酶标板，2.5％BSA封闭，分别加入未透析的标本和经Slide-A-Lyzer透析过的标本，一抗为兔抗人vWF多抗，二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG，加入底物OPD490nm显色。结果以透析前后的OPD490比值作为该份标本的残余胶原结合活性（ vWF:CBA或R- CBA ）表示， R- CBA 越高， vWF-CP活