生物化学核酸2讲解材料.pptVIP

4.3 核酸的性质----理化性质;DNA水解酶（DNases）;4.3 核酸的性质----水解;EcoR I;EcoR V;Denaturation and renaturation of nucleic acids;加热变性使DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为DNA的熔点 ( Tm） Tm值在 82 ~ 95°C之间： 与DNA均一性有关 与分子中的G和C含量有关 与DNA溶液条件有关 离子强度高，Tm高;4.6 核酸的生物功能;DNA复制（ replication);DNA半保留复制（DNA replication）;DNA复制 ------ 半不连续复制;DNA复制的酶系;解链酶和单链DNA结合蛋白;;;连接酶连接2个冈崎片断;DNA复制酶系总览 ;DNA不是直接决定所合成的蛋白质的模板 ;RNA转录（transcription）;RNA转录（transcription） ;RNA复制与逆转录 ; 引 物 合成需要RNA引物 合成不需要引物;;蛋白质翻译---- 蛋白质生物合成 ;翻译时须从起始密码AUG开始确定阅读框架。 ;1. 密码无标点：为不重叠的三联体密码。 2. 密码通用性和变异性：共用一套遗传密码。 3. 密码简并性：一种密码子仅对应一种氨基酸，但一种氨基酸对应几种密码子，除Met，Trp外，其余氨基酸由2~6个密码子编码（同义密码子）。意义：减少有害突变，维持物种稳定性。 4. 密码变偶性：密码子专一性取决于前两位碱基。;tRNA转运氨基酸至mRNA模板 ;1. 核糖体沿着mRNA的5’ 3’移动， 2. mRNA以同一方向被译读， 3. 肽链从N-端 C-端延伸。 4. 肽链氨基端第一个氨基酸残基一定是Met， 5. 合成结束后 Met 将被切除。;蛋白质翻译----三种 RNA与蛋白质合成 ;开始翻译;;加工与修饰 ;Nobel Prize of Physiology or Medicine 1999 ;真核细胞中蛋白的合成及转运 ;蛋白质合成后的去路 ;重组DNA技术 聚合酶链反应（PCR） 基因定点突变 核酸疫苗;1. 重组基因：把目的基因DNA片段插入到载体DNA分子的合适部位，得到一个新的DNA分子； ２. 转化：把这个重组DNA分子转移到宿主细胞内，载体有抗药标记，筛选出含有重组DNA的宿主细胞群体。 ３. 繁殖、扩增和表达：重组DNA分子复制，最终重组基因得到表达－－目标蛋白质。;;载体DNA分子 ;;外源基因;基因工程的工具： 1.剪刀：限制性内切酶 2.针线：连接酶 3.载体：质粒或噬菌体 PS：谁是裁缝???;世界上第一只转基因动物 ;转基因番茄---耐贮藏 ;蓝玫瑰（blue rose） ;2000年10月2日在美国首只转基因灵长类动物安迪培育成功. ;封面故事： Nature vol.459 (7246), (28 May 2009) ;2009年5月27日、日本培育出可“复制”人类疾病的转基因的荧光猴 ;绿色萤光蛋白 (green fluorescent protein)，简称GFP;转基因葡萄 ;1985, Mullis, an idea during a night driving in the Californian mountains ;聚合酶链式反应（PCR） ;聚合酶链式反应（PCR） ; 变性、退火、延伸 ------ 三步曲 ;聚合酶链式反应（PCR） ;PCR可以把指定的基因片段数量放大;PCR技术的应用 ;先人工合成引物DNA，再通过突变DNA的转录、翻译和表达，获得氨基酸序列在某一点或某几点发生突变的蛋白质的技术。 氨基酸的顺序 碱基顺序 如： Ser ( TCT )换成Cys ( TGT ) mRNA: Ser(UCU) Cys(UGU);克隆(Clone/cloning)的概念： 名词：无性繁殖系，指来源于单个细胞无性繁殖的细胞群体； 动词：指形成无性繁殖系的过程或方法。 分子、细胞、个体水平： DNA克隆或分子克隆； 微生物、动植物细胞培养； 重组胚胎动物克隆技术。;克隆技术 ;克隆猫;目前中国共有克隆羊30只，其中上海拥有19只。 上海的第一批克隆羊为单纯的体细胞克隆羊，目前存活3只;2003年5月28日降生“普罗米塔 从“代孕母亲”身上提取细胞克隆出后代;克隆技术 ;4.8