谷氨酸依赖型氨基转移酶的高通量筛选方法及其应用＊精选.pdfVIP

中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology 谷氨酸依赖型氨基转移酶的高通量筛选方 法及其应用＊ ＊＊ ＊＊ 贺霖伟 刘璋敏 冯雁 崔莉 （上海交通大学生命科学技术学院 微生物代谢国家重点实验室 上海 200240） 摘要 目的：建立谷氨酸依赖型氨基转移酶-谷氨酸脱氢酶偶联反应的96 孔板高通量筛选方 法，并用于大肠杆菌氨基转移酶WecE 突变库的筛选。方法：通过优化偶联指示酶-谷氨酸 脱氢酶、信号分子NADH 浓度及双酶偶联反应时间，建立了光学法测定氨基转移酶活性的 氨基转移酶-谷氨酸脱氢酶偶联反应方法；通过定点饱和突变技术构建了大肠杆菌氨基转移 1 酶WecE 的突变库；采用96 孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了高活性的转氨酶突变体，并 v 3 对纯化的突变体进行催化活力分析。结果：建立了谷氨酸依赖型氨基转