分子克隆-DNA测序技术技巧.pptVIP

第四章 分子克隆 一、 分子克隆与基因工程 （一）、分子克隆(molecular cloning)是指按照人的意愿, 在体外将制备的DNA片段与载体重组, 然后导入受体细胞, 并在受体细胞中复制、 扩增, 以获得该DNA分子的大量拷贝。此技术称为分子克隆技术或DNA重组技术. （二）、基因工程(genetic engineering)是指将基因进行克隆, 并利用克隆的基因表达,制备特定的蛋白质或多肽产物, 或定向改造细胞和个体的特性所用的方法及相关工作。它包括上游技术(分子克隆)和下游技术(基因表达)。 第一节 工具酶 一、 分子克隆的主要因素：工具酶、载体和受体细胞。 二 、工具酶的定义 工具酶(tool enzyme)是在DNA的切割 、合成、 剪切 补平、 连接和修饰等过程中起重要作用的酶类。常用的主要有:限制性核酸内切酶、 DNA聚合酶I、 反转录酶、 DNA连接酶 、碱性磷酸酶、 多核苷酸激酶和末端脱氧核苷酰转移酶等。 三 、限制性核酸内切酶 (restriction endonuclease) （一）、定义：是一类能识别和切割双链DNA特定核苷酸序列的核酸水解酶. （二）、分类：根据限制酶的结构与作用特点不同,可将它们分为I、 II和III。其中II能识别双链DNA特定核苷酸序列,并在此序列内有特异的切割位点产生特异的DNA片段。