microrna4833p对人神经胶质瘤细胞的作用.pdfVIP

中国病理生理杂志　 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　 ２０１７，３３（７）：１１６３⁃１１７０ ·１１６３ · 杂志网址：ｈｔｔｐ：／ ／ ｗｗｗ．ｃｊｐｐ．ｎｅｔ ［文章编号］　 １０００⁃４７１８（２０１７）０７⁃１１６３⁃０８ ＭｉｃｒｏＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ对人神经胶质瘤细胞的作用∗ 赵　 克，　 刘康栋△ （郑州大学附属肿瘤医院神经外科，河南 郑州４５０００８） 　 　 ［摘　 要］　 目的：探讨ｍｉｃｒｏＲＮＡ （ｍｉＲＮＡ）⁃４８３⁃３ｐ对人神经胶质瘤细胞Ａ１７２生长和迁移能力的影响及潜在 作用机制。 方法：实时荧光定量聚合酶链式反应（ＲＴ⁃ｑＰＣＲ）检测人肾胚细胞系ＨＥＫ⁃２９３ 和不同神经胶质瘤细胞 株（Ａ１７２、Ｕ２５１和ＳＨＧ４４）中ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ 的表达水平。 转染ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ抑制序列（ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ） 下调Ａ１７２细胞中ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ 的表达，采用ＣＣＫ⁃８法和流式细胞术检测细胞活力和周期分布；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检 测细胞的迁移；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测周期相关调控因子及上皮⁃间充质转化相关蛋白的水平。 双萤光素酶报告基因分 析法预测及验证其可能的靶基因。 结果：ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ 在各型神经胶质瘤细胞中高表达。 沉默ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ 后，Ａ１７２细胞的活力下降并呈现出明显的周期阻滞，且细胞迁移率也显著降低。 同时细胞中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１、周期蛋白 依赖性激酶４、磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白、Ｎ⁃ｃａｄｈｅｒｉｎ及 ｖｉｍｅｎｔｉｎ 的蛋白表达水平均显著降低，Ｅ⁃ｃａｄｈｅｒｉｎ 和 β⁃ ｃａｔｅｎｉｎ 的蛋白表达水平显著升高。 双萤光素酶报告基因分析显示Ｓｍａｄ４ 是ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ 的可能作用靶点，Ａ１７２ 细胞共转染 ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ 和 Ｓｍａｄ４ ｓｉＲＮＡ 可部分逆转 ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ 介导的细胞增殖及迁移抑制。 结论：沉默ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ 可通过靶向Ｓｍａｄ４抑制神经胶质瘤细胞株Ａ１７２ 的生长及迁移。 ［关键词］　 ＭｉｃｒｏＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ；神经胶质瘤；细胞活力；细胞迁移；Ｓｍａｄ４ 　 　 ［中图分类号］　 Ｒ７３９．４１；Ｒ７３０．２３　 　 　 ［文献标志码］　 Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００⁃４７１８．２０１７．０７．００２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌｓ ＺＨＡＯ Ｋｅ，ＬＩＵ Ｋａｎｇ⁃ｄｏｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，Ｈｅｎａｎ ＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００８，Ｃｈｉｎａ． Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｋｄｌｉｕ＠ ｚｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ） 　 　 ［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］　 ＡＩＭ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡ （ｍｉＲＮＡ）⁃４８３⁃３ｐｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆ ｈｕ⁃ ｍａｎ ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＡ１７２ ａｎｄｉｔｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆ ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐｉｎｈｕｍａｎｅｍｂｒｙ⁃ ｏｎｉｃ ｋｉｄｎｅｙ２９３ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ （Ａ１７２，Ｕ２５１ａｎｄ ＳＨＧ４４）ｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙ ＲＴ⁃ｑＰＣＲ． Ａｆｔｅｒ ｄｏｗｎ⁃ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲＮＡ⁃４８３⁃３ｐ ｂｙ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ Ａ１７２ ｃｅｌｌｓ，ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ ＣＣＫ⁃８ ａｓｓａｙ，ｆｌ