腺病毒载体介导的可调控鼠白细胞介素12.pdfVIP

·1372· 生堡匡堂盘查!Q塑生!旦堑旦筮!!鲞筮垫翅盟趔丛鲤』￡!i鲢：丛塑堑：兰Q塑：!垡：塑：盟!：垫 ·大肠癌诊治． 2 腺病毒载体介导的可调控鼠白细胞介素1 基因对大肠癌小鼠的治疗效果 陈坚刘绪舜 王峰 薛绪潮 方国恩 苏长青钱其军 【摘要】 目的构建携带鼠白细胞介素12(mlL一12)基因并可经RU486诱导表达的重组腺病毒 载体，研究其对小鼠大肠癌移植瘤的治疗效果及安全性。方法 将穿梭质粒pDC．RUmlL．12与 Admax腺病毒包装系统的辅助质粒pBHGioxAEl，3Cre共转染HEK293细胞后，构建出可调控的复制 缺陷性重组腺病毒载体，用mlL-12引物对病毒进行鉴定；氯化铯密度梯度离心纯化病毒，最终稀释法 测定其滴度。体外感染结肠癌C26细胞后，用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其基因调控表达。 皮下注射C26大肠癌细胞构建小鼠大肠癌动物模型，将60只小鼠分成4组(Ad．缓冲液对照组、Ad． RUmlL一12对照组、Ad—RUmlL·12+RU486治疗组和Ad-mlL一12治疗组)，从各组的肿瘤大小、病理及 血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平等方面评价各组的治疗效果及不良反应。结果经PCR鉴定证 X 实可调控腺病毒载体Ad-RUmIL-12构建正确，纯化后病毒滴度达到4．62 1010空斑形成单位 (p缸)／nll。病毒感染体外培养的C26细胞后，给予诱导剂RU486则最高可诱导表达raiL-12蛋白(516 +43)pg／mJ，而不加人和去除RU486时，只有少量的mlL-12蛋白表达[(38±3)p罾／lnl、(424-5)p∥ m1]。在小鼠动物模型上，Ad．RUmlL-12对照组和Ad．缓冲液组肿瘤生长较快；Ad．RUmIL．12+RU486 治疗组和Ad—mlL-12治疗组对肿瘤生长有明显的抑制作用，病理检查显示两组肿瘤有较明显的坏死， 而前组小鼠的血清ALT水平和不良反应发生率明显低于后组(4／15比10／15，P0．05)。结论成 功构建了可调控重组腺病毒Ad-RUmIL-12，可以通过RU486诱导mlL-12蛋白的表达，并对大肠癌移 植瘤有杀伤作用，明显提高了肿瘤基因治疗的安全性。 【关键词】基因调控网络； 白细胞介素12；结肠肿瘤；小鼠；腺病毒载体 Constructionof indudblerecombinantadenoviralvector a RU钙6 murineinterleukin-12 carrying and treatmentofcoloniccarcinomaCHEN gene experimental Jian‘，UUJjfu．shun。WANGFeng， xUE General Xu-chao，FANGGuo—err．SU Qi-jm’Departmentof Chang-qing，QIAN Surgery．No．81 21伽．C阢na Hospitalof尸：LA．Nanfing General Correspondingauthor：XUEXu_chao。DepartmentSurgery，Changhai ll靠litary of Hospital。Second Medical University．Shanghai200433．