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（DP439）石蜡包埋组织切片 总RNA提取试剂盒操作指南 天根生化科技（北京）有限公司 版本号 实验准备 1. 石蜡组织块 2. 无水乙醇，β-巯基乙醇，二甲苯 3. 移液器，配套无菌枪头（200 μl ，1ml），一次性无菌注射器（Dnase I配置） 4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴台式低温离心机 实验准备-试剂盒准备1 第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇， DNase I储存液的配制 加入量请参见瓶上标签。并在加入无水乙醇后 在瓶身做好标记。 将DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。 2 注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃ （可保存6周），不要再次冻存。 实验准备-试剂盒准备2 此步骤建议在通风橱内操作 操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓 度为1%，如1 ml RL中加入10 μl β-巯 基乙醇。此裂解液最好现用现配。配 好的RL 4℃可放置一个月，裂解液RL 在储存时可能会形成沉淀，如果有沉 淀出现，请加热溶解后使用。 Step 1 将石蜡样品切成5-10 μm厚的片状。 注意: 如果样品表面暴露于空气中, 最初的2~3片弃掉不用。 注意：应采用新鲜的FFPE组织切片,切片厚度不超过10 μm，切片过厚可能会造成RNA得率低，每次制备采 2 用的切片数应不超过8片，表面积应不超过250 mm 。如果没有起始样本的信息，建议初次制备采用的切片 数应不超过2片，然后根据RNA的得率和纯度，下次制备采用的切片数可以进行调整，但应不超过8片。 Step 2 迅速将2-8张切片置于 加入1 ml二甲苯，剧烈涡旋10sec。 1.5 ml RNase-free的离心管中， Step 3 室温(15-25℃)，12,000 rpm(~13,400×g) ，离心2 min Step 4 用枪头吸除上清，小心不要吸到沉淀。 Step 5 加入1 ml 无水乙醇于沉淀中，涡旋混匀。 Step 6 室温(15-25℃)，12000 rpm (~13,400×g)离心2 min 。 Step 7 用枪头吸除上清，小心不要吸到沉淀 （用一个新的枪头小心吸出残余的乙醇）。 Step 8 打开管盖，室温(15-25℃)或37℃放置10 min直至残余的乙醇挥发完全。 注意:完全去除残余的乙醇很重要，残余的乙醇会对RNA产生影响。 Step 9 加入200 μl 裂解液RF以及10 μl Proteinase K于沉淀中，彻底涡旋混匀。 Step 10 55℃孵育15 m