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囊泡运输及信号转导 李巍概述：细胞内蛋白质在内质网合成后，主要通过囊泡运送到细胞内各细胞器或分泌到胞外，因而囊泡运输是细胞器生物合成的基础，也是细胞生物学的基本内容之一。细胞内的囊泡运输途径是一个复杂的生物学过程,数百种蛋白质和调节因子，形成一个相互作用的网络.一些大分子与颗粒物质不能穿过细胞膜，而是被包裹在膜围绕的小泡中进行运输，称为囊泡运输。本节主要讲了：囊泡运输途径、囊泡运输调控、囊泡运输及信号转导、运输堵塞囊泡运输途径进行囊泡运输的主要细胞器：高尔基体、内质网、核内体（EE、LE、RE）、溶酶体（LRO）、线粒体、过氧化物酶体、细胞核。蛋白质分选概述：膜结合核糖体上合成的蛋白质，通过信号肽，在翻译的同时进入内质网，然后经过各种加工和修饰，使不同去向的蛋白质带上不同的标记，最后经过高尔基体反面网络进行分选，包装到不同类型的小泡，并运送到目的地（主要有三种去向：分泌到胞外，构成膜蛋白，进入胞内体途径）。囊泡运输构成：货物（cargoes）：配体/受体；包被复合物（complexes）：网格蛋白、COPⅠ、COPⅡ等；马达蛋白（motors）——运输工具：动力蛋白、驱动蛋白、 肌球蛋白等；运输轨道（track）：复杂的网络骨架（微管、微丝、中间纤维等）。囊泡运输机制：膜的特定区域以出芽的方式，形成衣被小泡；膜的表面识别特征使其准确运到靶细胞器；衣被小泡在细胞内沿微管、微丝运输；膜泡由马达蛋白负责运输；利用SNAREs 和Rab分子定向、膜融合。囊泡运输研究过程中的里程碑事件：1970年George Palade描述了分泌途径；1975年Brown Goldstein描述了LDL受体内吞途径；1975年Gunter Blobel描述了信号肽途径；1980年Ciechanover, Hershko, Rose描述了泛素介导的蛋白质降解途径；1980、1994年Randy Schekman’ s group鉴定了23sec突变体（酵母中蛋白质分泌缺陷）和COPII复合物；1984、1993 Jim Rothman ’s lab鉴定了哺乳动物intra-Golgi转运和SNARE复合体；1996年Richard Spritz’s lab鉴定了可以引起转运阻断的HPS1基因 囊泡运输的调控囊泡运输调节器：SNARE complexes、Rabs、Phosphoinositides（磷脂酰肌醇类）、分子马达、Ca2+、G蛋白等SNARE复合体（NSF:锚定蛋白受体的可溶性N-乙马来酰亚胺敏感因子）SNARE假说：从分子水平上来解释膜泡运输过程中融合机制的主要模型为SNARE假说。该假说认为每种类型的运输膜泡都有不同的v-SNARE蛋白质，可与相应靶膜上的特异的t-SNARE识别配对，通过这种特异的相互作用将膜泡锚定到靶膜上，形成反式SNARE复合物，然后在α-SNAP蛋白质的辅助下，通过NSF蛋白质的ATP酶活性可逆地解离SNARE蛋白质复合物，驱动膜融合，形成顺式SNARE复合物。SNARE的种类：v- SNARE、t- SNARE。SNARE是一些小的蛋白质，分子量为18～42KD。所有SNARE蛋白的标志是它们在近膜端区都含约60个保守的氨基酸残基组成的七段重复序列（称为SNARE基序）。可以形成coiled - coil结构，此螺旋束可连接两个相对的膜进行膜融合。SNAREs调节机制：无衣膜泡与受膜的融合是SNAREs的作用实现的。位于运输小泡上的叫作v-SNAREs，位于靶膜上的叫作t-SNAREs。v-SNAREs和 t-SNAREs都具有一个螺旋结构域，能相互缠绕形成跨SNAREs复合体，并通过这个结构将运输小泡的膜与靶膜拉在一起，实现运输小泡特异性停泊和融合。在SNAREs接到新一轮的运输小泡停泊之前，SNAREs必须以分离的状态存在，NSF和SNAP催化 SNAREs的分离，它是一种类似分子伴娘的ATP酶，能够利用ATP作为能量通过插入几个适配蛋白将SNAREs复合体的螺旋缠绕分开。Rab蛋白及其调控机理Rab蛋白是Ras-like GTPases，可调控真核细胞中的膜转运。人类细胞中Rab蛋白的含量60，其定位可区分区室，对不同的运输途径具有特异性。膜偶联的Rabs通过Rab GGTase和Rab escort protein (REP)使其C端烯化除了锚定蛋白外，还有其他一些蛋白参与调节囊泡转运。这其中Rab尤为重要。Rab属GTP结合家族，含有200个氨基酸，蛋白结构与Ras极为相似，通过不断结合与水解ATP的循环过程，调节囊泡的融合速度。胞浆中存在着异种蛋白，称为GDI，可特异性催化Rab与GDP解离，并与GTP结合，使Rab分子构象发生改变，改变了构型的Rab蛋白暴露出其脂基团，从而将Rab蛋白锚定到膜上。