普鲁兰多糖发酵工艺.pdfVIP

普鲁兰多糖发酵工艺实验 乔长晟 教授 生物工程学院 实验目的 1. 掌握普鲁兰多糖发酵工艺及控制要点 2. 掌握好氧发酵设备的操作流程与规范 3. 掌握必要的分析检测方法 实验原理 普鲁兰多糖（Pullulan）中文亦译为茁霉多糖、出芽短 梗孢糖、普聚多糖或普鲁兰糖。它是出芽孢梗霉（ Aureobacidium pullulans ）产生的胞外多糖，以α-1,6-糖 苷键结合麦芽糖构成同型多糖为主，即葡萄糖按 α-1，4-糖 苷键结合成麦芽三糖，两端再以 α-1，6-糖苷键同另外的麦 芽三糖结合，如此反复连接而成高分子多糖。 α-1，4-糖苷 键同 α-1，6-糖苷键的比例为2：1，聚合度（D.P）为100－ 4 6 5000。分子量4.8 ×10 －2.2×10 （日本商品普鲁兰糖平均 5 分子量2×10 ，大约由480个麦芽三糖组成）。 实验原理 普鲁兰多糖的生产原料主要是蔗糖、葡萄糖、淀粉水解 物等糖质原料，生产过程为微生物发酵过程及生化提取过 程，生产技术较为复杂。普鲁兰多糖结构式 4 实验材料 • 蔗糖、蛋白胨、水等 • 灭菌锅、摇床 、5L全自动发酵罐 实验步骤 内容 1. 工艺流程 空气 菌种 蔗糖或淀粉水解物等 空气净化 种子罐 发酵罐 发酵液 实验步骤 1. 斜面培养基的配方、制备、保存 1.1 斜面培养基制备 先将马铃薯洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块，加水 煮烂（煮沸20~30min，能被玻璃棒戳破即 可），用四层 纱布过滤，添加20g蔗糖和20g琼脂，继续加热搅拌混匀， 稍冷却后再补足水分至1000mL，分装试管，加塞、包扎， （121℃）灭菌20min左右后取出试管摆斜面或者摇匀，冷 却后贮存备用。培养基经灭菌后，必须放在37℃温箱培养 24h，无菌生长者方可使用。 1.2 斜面种子转接新鲜斜面 将保藏于4℃冰箱的母斜面取出，置于28℃培养箱中活化 8h，用划线法接种到斜面上，置于28℃培养箱培养4d 。 7 实验步骤 2. 普鲁兰多糖发酵工艺配方 2.1 种子培养基配方:蔗糖10%，蛋白胨3%, K HPO 2%, 2 4 MgSO 0.4%, NaCl2.5%, FeSO 0.001%, pH7.0 4 4 2.2 发酵培养基配方：蔗糖10%，蛋白胨5%, K HPO 7%, 2 4 MgSO 0.4%, NaCl2.5%, FeSO 0.001%,