基因结构分析策略-2014-3.pptVIP

主要内容： 1. cDNA克隆测序 AAAAAn AAAAAn AAAAAn mRNA 反转录酶 (末端转移酶活性) AAAAAn Oligo (dT)15-18 TTTTT15-18 cDNA第一链 CCCCC TTTTT15-18 cDNA第一链 nCCCC nGGGG cDNA第二链 克隆扩增，5?端测序分析 反转录酶的末端转移酶活性 Oligo (dG)15-18 mRNA 与线性载体相连接 要求： cDNA的5?端完整无缺 2. cDNA末端快速扩增技术(RACE) 传统的RACE (rapid amplification of cDNA ends) ： AAAAAn mRNA AAAAAn TTTTT15-18 cDNA mRNA -5? 3?- 反转录酶 Oligo (dT)15-18 末端转移酶 dGTP TTTTT15-18 nGGGGG 锚定PCR扩增 TTTTT15-18 nGGGGG nCCCCC 锚定引物 特异引物 PCR产物 Deep-RACE： 用寡核苷酸替代mRNA的5′端帽结构以及发光标记巢氏PCR引物，能平行分析多个基因,并省却了耗时的克隆步骤，实现高通量鉴定转录起始点 。与常规的RACE PCR产物测序相比，它更为准确和经济。 AAAAAn 5?-p 帽 mRNA 牛小肠磷酸酶 (CIP) AAAAAn 5?-帽 烟草酸焦磷酸酶