使用液相色谱法或恒流二次离子质谱分析法对油菜和亚麻叶内的甜菜碱进行检测.docxVIP

使用液相色谱法或恒流二次离子质谱分析法对油菜和亚麻叶内的甜菜碱进行检测摘要 - 当植物体内的甜菜碱/三甲铵乙内脂积累到相当的数量时，可能促进植物的渗水调节功能。因而，促使甜菜碱在那些非积聚型植物体内的合成，也会使其受益。从生物学角度看，虽然只在诸如藜科类植物地肤(298.6μmol g- 1dry wt)以及赤红海篷子属植物体内(162μmol g-1 dry wt)检测出了大量的甜菜碱。但此成分在亚麻类植物(4μmol g-1 dry wt)和油菜籽(4.9μmol g-1 dry wt)中的出现则说明，在这些重要的植物中存在着一种合成甜菜碱的遗传潜质。这里所提到的液相色谱法/恒流二次离子质谱法的灵敏度要比其他方式高出了十倍，可以检测出(5μmol g-1 dry wt)这样的甜菜碱的下限含量.这种方式的灵敏性在50-1000的定量检测范围内得到了进一步的体现。简介- 甜菜碱是累积在某些细菌，植物和动物体内的“安分”的溶质。1863年，它在干旱带的灌木枸杞中被首次发现并命名。从那以后，在各种门类的植物中都发现了它的存在。其在盐生类和耐旱类植物中的含量不小(100μmol g-1 dry wt)，但是在其他植物中的含量则要少得多(0.2μmol g-1 dry wt)或者是无法测量。从生物学角度，人们认为甜菜碱是适应性渗透物质。通过对甜菜碱含量和植物生长地的比较，观察植物在在高盐度环境及干旱压力下体内甜菜碱合成度的上升情况，以及甜菜碱对于生物大分子抵御突变的环境条件所起的稳定作用，我们得出了以上理论。人们在细菌组织系统内的基因样本中确认，甜菜碱具有保护渗透性功能的作用。目前，作为改良提高植物应对渗透胁迫的方式，进行甜菜碱的合成对于基因工程有着重大的意义。然而从进化学和工程学角度来看，一个重要的问题是，这些所谓的无法积累甜菜碱的植物是否真的无法合成甜菜碱。想要圆满地解答这个疑问，使用高精度检测技术是必不可少的。甜菜碱的分析分为精度和专属性两方面。其中包括了早期的某些非定性的半定量的解析方式，诸如TLC（薄层层析）或是用于高碘化沉淀物测量的分光谱测量法，以及近期的HNMR(核磁共振氢谱分析)或是质谱测量法。所有这些方式中，快原子质谱测量法或二次离子质谱分析法是最灵敏的，他们用中性原子或原离子进行轰击促使化合物产生电离, 并以质荷比衡量分子离子(mh+)被质子化的程度。在对甜菜碱的质谱分析中，甜菜碱的初期衍生物产生了正丁胺-酯n-buty和正丙胺酯n-propy，可用来增加表层活跃度从而提升检验的精度.我们利用充满恒流的融石英微管进行次离子质谱分析，这种方法称为LC-质谱法，它可以使我们检测到5pmolul~1含量的甜菜碱。在分析微量样本时，这种检测方法不需要复杂的衍化并且可以提供相当高的测量精度和准度，也不费力。此外，我们的测量首次表明，经培育的油菜和亚麻品种明显含有少量的甜菜碱成果及讨论甜菜碱的质谱分析简图和测量标准的建立；通过对甜菜碱内质子化的分子离子在m/z 118.087的监测追踪。甜菜碱的洗提分离峰值出现在五分钟。在5 pmolμl-1 (Fig. 1B)的样本中的可识别信噪比4比1表明这一峰值已达到检测的精度下限。Rhodes曾提到，对正丙胺甜菜碱(n-propyl betaine)的检测下限是在50pmolul-1条件下实现2比1的信噪比。因此，用LC-MS的方式，可以检测到更细微的甜菜碱成分。图1 LC-CFSI-MS甜菜碱的显示的相对强度示例内容在不同的保留时间。选择离子色谱图的质子化了的分子离子的甜菜碱(m / z 118.087)均获得获得1nmolμl - l(A)和5 pmolμl - 1(B)中描述的甜菜碱实验。(B)中描述的甜菜碱实验。我们使用了一种内部的甜菜碱氘化标准[(CD3)一个n + ch2 coo -,缩写为d9)，消除了在样本萃取复原以及设备灵敏度方面的可变因素。大规模光谱响应率的不同浓度的甜菜碱(称为d0;50-1000pmolul-1)到一个固定数量的d9(890 pmolul-1)策划作为一个函数的浓度比提供了响应因子(图2)这一范围内的标准曲线是线性的。每摩尔浓度的Rf略高于1.0,这可能是由氘化标准的差异造成的。从图1b的噪声级可清楚地看到，监测下限的数值不是很精确。但这可以通过使用多个样本，以及降低噪声的方法来解决。即便如此，5pmolul-1的检测精度相比其他方式仍然好很多。Rhodesfa发现在450-45000pmolul-1的范围内表示正丙基甜菜碱的是一条平稳的直线，而FAB-MASS质谱分析法的检测条件下限则可达到50pmoul-1. 报告显示，监测精度值高于在85pmolul-1范围下使用高效液相色谱仪得到的结果。图2。校准曲线的各种数量(50 -pmol / 1