《氨基酸的纸上层析》.pptVIP

* * 氨基酸的纸上层析 一、实验目的 1、学习用纸上层析法进行分离和鉴定氨基酸。 2、掌握氨基酸纸上层析法的实验操作技术。 返 回 最 近 观 看ppt 回到主目录 合 成 目 录 二、实验原理 层析法又称色层分离法，是分配层析中的一种。分配层析是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离的。 纸层析是以纸作为惰性支持物的分配层析，纸纤维上的—OH具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。流动相流经支持物（滤纸）时与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到分离。 返 回 最 近 观 看ppt 回到主目录 合 成 目 录 纸上层析的实际操作是在滤纸的一端点上样品，干后，在密闭的容器内，待纸饱和了适当的溶剂蒸汽后，令溶剂从样品的一端经过毛细管的作用，流向另一端，使样品中的混合物得到分离（如下图示）。 层析点 点样处 单向层析 层析 返 回 最 近 观 看ppt 回到主目录 合 成 目 录 各成分被分开后，在滤纸上的实际位置可借喷涂适当的显色剂使其显色，这样就可以获得层析图谱。 物质分离后，层析点在图谱上的位置，即在纸上的移动速率，用Rf（比移值）表示。 层析点 原点 溶剂前沿 层析图谱示意图 返 回 最 近 观 看ppt 回到主目录 合 成 目 录 三、实验用仪器和试剂 1、仪器和材料： 烧杯（800ml）、层析滤纸（新华1#）18×11cm、毛细滴管、竹镊子、喷雾器、刻度尺、铅笔、烘箱、针线、电吹风、表面皿 2、试剂： （1）将下列氨基酸配制成1mg/mL的水溶液 缬氨酸、组氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甘氨酸 （2）组氨酸、谷氨酸、亮氨酸的混合物：取上述已配好的三个标准氨基酸溶液各10mL，混合均匀。 （3）缬氨酸、甘氨酸的混合物：取上述已配好的二个标准氨基酸溶液各10mL混合均匀。 （4）展开剂（需新鲜配制）：正丁醇：甲酸：水 = 15：3：2（V/V）。 （5）显色剂：0.1%茚三酮乙醇溶液。 返 回 最 近 观 看ppt 回到主目录 合 成 目 录 1、准备滤纸： 纸色谱所用滤纸与普通滤纸不同，两面要比较均匀，不含杂质。通常选用杭州新华1号层析滤纸，大小可根据需要自由选择。一般上行法所用滤纸的长度为20～30cm，宽度视样品个数而定。 戴上橡胶手套，将滤纸裁剪成18cm×11cm，沿18cm的一边，在距纸边缘2cm处，用铅笔轻轻划一条线，在此线上每隔2cm画一小圆圈作为点样处，圈直径不超过0.5cm。 示意图 四、实验步骤 返 回 最 近 观 看ppt 回到主目录 合 成 目 录 2、点样： 氨基酸的点样量以每种氨基酸含5～20ug为宜，将准备好的滤纸用竹镊子夹住，用毛细滴管在各小圆圈上依次点上七种氨基酸样品溶液[1]，样品量约10～20uml，点子不宜过大，点子的扩散直径控制在0.5cm之内。如果样品溶液过稀，可以在样品干燥后重复点样，必要时可反复数次[2]。 用电吹风将斑点吹干，将点好样品的滤纸两侧比齐，用线缝好，揉成筒状。注意缝线处纸的两边不要接触。避免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动特别快而造成溶剂前沿不齐，影响Rf值。 返 回 最 近 观 看ppt 回到主目录 合 成 目 录