2018 选修1 第1讲 无菌操作技术.doc

选修　生物技术实践 第1讲　无菌操作技术 考纲要求 全国卷五年考情 1.微生物的分离和培养 2017·卷ⅠT37，2016·卷ⅠT39，2016·卷ⅢT39，2015·卷ⅠT39，2014·卷ⅠT39 2014·卷ⅡT39，2013卷·ⅡT39 2.某种微生物数量的测定 2016·卷ⅠT39，2015·卷ⅠT39 3.培养基对微生物的选择作用 2014·卷ⅠT39，2013·卷ⅡT39 考点一| 微生物的分离和培养 (对应学生用书第227页) [识记—基础梳理] 1．相关技能、技术和方法 (1)无菌操作的技能——灭菌 ①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。 ②作用：微生物分离和培养的基础。 ③关键：防止外来杂菌的入侵。 (2)配制培养基 ①培养基概念： 为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。 ②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。 (3)接种微生物 ①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。 ②接种方法和常用工具(连线) 接种方法　　　　 常用工具 Ⅰ.涂布平板接种　　 a．接种针 Ⅱ.穿刺接种　 b．接种环 Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器 Ⅳ.平板划线接种 [答案]　Ⅰ－c　Ⅱ－a　Ⅲ－b　Ⅳ－b 2．大肠杆菌的接种与分离培养 (1)配制牛肉膏蛋白胨培养基 其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。 (2)斜面接种和培养大肠杆菌 ①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。 ②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。 (3)平板划线分离和培养大肠杆菌 ①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。 ②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。 [理解—深化探究] 1．微生物的培养基 (1)培养基的成分 营养要素 来源 功能 碳源 无机碳源 CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物 a.构成细胞物质和一些代谢产物 b.既是碳源又是能源(有机碳源) 有机碳源 糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等 氮源 无机氮源 无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 有机氮源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 生长因子 维生素、氨基酸、碱基 a.酶和核酸的组成成分 b.参与代谢过程中的酶促反应 水 培养基、大气、代谢产物 不仅是良好的溶剂，还是结构物质 无机盐 培养基、大气 细胞内的组成成分，生理调节物质；某些化能自养型细菌的能源；酶的激活剂 (2)培养基的分类 种类 特点 应用 物理 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 性质 固体培养基 加凝固剂 微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏 化学成分 天然培养基 含化学成分不明的天然物质 工业生产 合成培养基 培养基成分明确或用一定化学物质配制 分类、鉴定 用途 选择培养基 添加某物质，抑制杂菌生长，促进所需微生物生长 培养分离出特定微生物 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂 鉴别微生物 2.无菌技术 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高温的液体 化学药剂消毒法 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具 干热灭菌法 玻璃器皿、金属工具 高压蒸汽灭菌法 培养基及容器 3.微生物培养中的几个图形分析 图一 图二 (1)图一为倒平板操作过程。操作时要待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行。温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。平板冷却凝固后需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。 (2)图二为系列稀释操作。注意移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm处。 4．微生物纯化培养过程结果分析 (1)B区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是1。 (2)在培养基上划线接种时，划线的顺序依次是A→C→B。 [运用—考向对练] ◎考向　微生物的分离和培养 1．(2018·吉林长春二模)下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。 实验步骤： ①把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基1的表面，进行培养。 ②待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基