日本岛津UV2550分光光度计 操作重点培训.ppt

山东安和安全技术研究院有限公司 检测部 Tel: (0543) 3065070 E_mail: bzsa163.com;紫外-可见吸收光谱 吸收光谱的测量-----Lambert-Beer 定律 紫外-可见分光光度计仪器组成 分析条件选择 UV-Vis分光光度法的应用 紫外-可见分光光度计的维护和保养 UV-Vis方法是分子光谱方法，它利用分子对外来辐射的吸收特性。 UV-Vis涉及分子外层电子的能级跃迁；光谱区在160~780nm. UV-Vis主要用于分子的定量分析，但紫外光谱(UV)为四大波谱之一，是 鉴定许多化合物，尤其是有机化合物的重要定性工具之一。 ;紫外-可见吸收光谱;电磁波谱; 一、分子吸收光谱的形成 1. 过程：运动的分子外层电子--------吸收外来外来辐射------产生电子能级跃迁-----分子吸收谱。;2. 能级组成：除了电子能级(Electron energy level)外，分子吸收能量将伴随着分子的振动和转动，即同时将发生振动(Vibration)能级和转动(Rotation)能级的跃迁！据量子力学理论，分子的振-转跃迁也是量子化的或者说将产生非连续谱。因此，分子的能量变化?E为各种形式能量变化的总和： 其中?Ee最大：1-10 eV; ?Ev次之：0.05-1 eV; ?Er最小：?0.05 eV ;能级跃迁示意图;各轨道能级高低顺序：???? n??*??*； 可能的跃迁类型：?-?*；?-?*；?-?*；n-?*；?-?*；n-?*;几个概念： 生色团（Chromogenesis group）： 分子中含有非键或?键的电子体系，能吸收外来辐射时并引起n-?* 和?-?*跃迁，可产生此类跃迁或吸收的结构单元，称为生色团。 助色团（Auxochromous group） ： 含有孤对电子，可使生色团吸收峰向长波方向移动并提高吸收强度的一些官能团，称之为助色团。 红移或蓝移（Redshift or blueshift）： 在分子中引入的一些基团或受到其它外界因素影响，吸收峰向长波方向（红移）或短波方向移动（蓝移）的现象。 ;吸收光谱的测量Lambert-Beer 定律; 一、透射率T%?; 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比，即 k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。 ? 当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数，以 a 表示，即 ? 当浓度以mol/L表示???，称 k 为摩尔吸光系数，以? 表示，即 ? 比 a 更常用。? 越大，表示方法的灵敏度越高。? 与波长有关，因此，? 常以??表示。 ; 样品吸光度 A 与光程 b 总是成正比。但当 b 一定时，A 与 c 并不总是成正比，即偏离 L-B 定律！这种偏离由样品性质和仪器决定。 1. 样品性质影响 a）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射 的吸收能力发生变化---? 变化； b）试液中各组份的相互作用，如缔合、离解、光化反应、异构化、配 体数目改变等，会引起待测组份吸收曲线的变化； c）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响； d）胶体、乳状液或悬浮液对光的散射损失。 ;2. 仪器因素 仪器因素包括光源稳定性以及入射光的单色性等。 a）入射光的非单色性：不同光对所产生的吸收不同，可导致测定偏差。 ;紫外-可见分光光度计仪器组成;UV示意图; 紫外-可见光度计仪器由光源、单色器、吸收池和检测器四部分组成。 一、光源 对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。 1. 钨及碘钨灯：340~1500 nm，多用在可见光区； 2. 氢灯和氘灯：160~375nm，多用在紫外区。 二、单色器(Monochromator) 与原子吸收光度仪不同，在UV-Vis光度计中，单色器通常置于吸收池的前面！（可防止强光照射引起吸收池中一些物质的分解） 三、吸收池(Cell，Container)： 用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和可见光区；后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。 四、检测器： 硅光电池、PMT、PDA;UV2550光路图;分光光度计的校正 当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移，因此需要对其进行校正。 波长标度校正： 使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进行校正。因为二者均有其各自的特