2012年高考、复习与学科能力：生物-2012名师一号（精品课件）：3.1专题一 基因工程.ppt

共 65 页 教材基础回扣 1.概念:即[1]DNA重组技术,是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过[2]体外DNA重组和[3]转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品? 考点迁移互动 考点1 基因工程的概念及操作工具 1.基因工程的概念 按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型或生物产品,又叫DNA重组技术? 特别提醒:对基因工程概念的理解 2.基因工程的操作工具 特别提醒:DNA连接酶与DNA聚合酶的不同 ①DNA聚合酶,只在DNA复制时起作用?它只能按照模板链的要求将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接形成DNA的一条子链? ②DNA连接酶,在基因工程中起作用,它可以将两个DNA片段之间的两个缺口通过磷酸二酯键同时连接起来,因此DNA连接酶不需要模板? ③质粒是最常用的运载体,不要把质粒同运载体等同,除此之外,噬菌体和动植物病毒也可作为运载体? 【例析1】 下列是四种限制酶切割形成的8个末端,你是否能用DNA连接酶将它们连接起来? [解析] 1?4?5?8都是错切形成的黏性末端,据碱基排列顺序可确定4和8?1和5具有相同的黏性末端,能连接成功;2?3?6?7都是平切形成的平末端,据碱基排列顺序可确定2和7;3和6分别为相同限制酶切割,可连接成功? [方法技巧] 对于黏性末端的判断,只要伸出的部分从外向里碱基序列一致即为相同的,不管这两个相同的序列是同在上方,同在下方,还是一个在上,一个在下?如上题中1和5?4和8,即使把上链和下链位置颠倒也不相同?对于平末端可将切割点和上?下链分为四部分:左上?右下?右上?左下?,其中左上和右下碱基序列反向相同,右上和左下的碱基序列反向相同,如上题中2和7?3和6? 【互动探究1】 下面是5种限制性核酸内切酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图(↓表示剪切点,切出的断面为黏性末端):限制酶1:—↓GATC—限制酶2:—CATG↓—限制酶3:—G↓GATCC—限制酶4:—CCGC↓GG—限制酶5:—↓CCAGG— 请指出下列哪项表述正确( ) A.限制酶2和4识别的序列都包含4个碱基对 B.限制酶3和5识别的序列都包含5个碱基对 C.限制酶1和3剪出的黏性末端相同 D.限制酶1和2剪出的黏性末端相同 [解析] 本题考查基因工程的工具限制性核酸内切酶及学生的推理能力?综合运用知识分析解决问题的能力?限制酶2?3?4?5所识别的碱基对分别是4个?6个?6个和5个,因此A?B表达错误;限制酶1剪出的黏性末端是 相同,而限制酶1和2剪出的黏性末端不同,故C正确,D错误? [答案] C 考点2 基因工程的基本操作与应用 一?基本操作步骤 1.目的基因的获取 (1)目的基因:主要是指编码蛋白质的结构基因(即人类所需要的基因)? ①从基因文库(基因组文库或cDNA文库)中获取 ②人工合成目的基因:常用的方法有化学合成法和反转录法? 2.基因表达载体的构建——重组质粒的构建 (1)表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因 (2)构建步骤 ①用一定的限制酶切割质粒,使其出现 一个有黏性末端的切口 ②用同种限制酶切断目的基因,产生 相同的黏性末端 ③将切下的目的基因片段,插入到质粒的切 口处,再加入适量的DNA连接酶,使质粒 与目的基因结合成重组质粒 3.将目的基因导入受体细胞——转化 (1)受体种类不同, 导入方法不同 植物:农杆菌转化法?基因枪法?花粉 管通道法等 动物:显微注射法 衍生物:感受态细胞法 (2)受体种类不同,所用的受体细胞种类也不相同 植物:可以是卵细胞(受精卵)?体细胞(可经组织培养成为完整个体)? 动物:受精卵(因为体细胞的全能性受到严格限制)? 4.转化实质:目的基因整合到受体细胞染色体基因组中? 5.目的基因的检测与表达 (1)导入检测:DNA分子杂交法(使用DNA探针)? (2)表达检测 转录检测:分子杂交法检测mRNA 翻译检测:免疫法,提取蛋白质用相应的抗 体进行抗体—抗原杂交 (3)个体生物学水平鉴定:如作物抗性等? 特别提醒:①切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶,以获得相同的黏性末端,利于重组质粒的构建? ②插入的目的基因只是结构基因部分,其表达需要调控序列,因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子,后须有终止子?启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)? ③DNA复制?PCR技术与基因克隆 二?基因工程的应用 1.乳腺生物反应器的优点及操作过程 (1)优点:产量高?质量好?成本低?易提取? (2)操作过程 获取目的基因(如血清白蛋白基因)→