第十一章 致癌致突变物的生物学检测.pptVIP

第十一章 Ames试验 诱变剂与致癌物质——Ames试验 a）利用各种诱变剂获得各类遗传突变，进行诱变育种； c）危害人类自身的健康 b）对有害微生物进行控制； 很多种化学物质，能以各种机制导致DNA的突变 “生物化学统一性”法则： 人和细菌在DNA的结构及特性方面是一致的，能使微生物发生突变的诱变剂必然也会作用于人的DNA，使其发生突变，最后造成癌变或其他不良的后果。 Ames试验的依据 诱变剂的共性原则： 化学药剂对细菌的诱变率与其对动物的致癌性成正比 超过95%的致癌物质对微生物有诱变作用 90%以上的非致癌物质对微生物没有诱变作用 回复突变(reverse mutation或back mutation)： 突变体失去的野生型性状，可以通过第二次突变 得到恢复，这种第二次突变称为回复突变。 美国加利福尼亚大学的Bruce Ames教授于1966年发明， 因此称为Ames试验 标准菌株要求： 检测鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhmurium) 组氨酸营养缺陷型菌株(his-)的回复突变率（为了增加试验的敏感性，该菌株还应包括另外两个突变，一个是造成细胞表面透性增加的深度粗糙突变型，另一个是丧失切除修复能力的缺失型）。 营养缺陷型（auxotroph） 特点： 在选择培养基（一般为基本培养基）上不生长 负选择标记 突变株不能通过选择平板直接获得 原理 鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型，因而能生长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。 某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变， 故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S9混合液。 细菌回复突变试验(Ames试验) 鼠伤寒沙门氏菌原养型(his+) 组氨酸营养缺陷型突变株。(his-) 正向突变 回复突变 代谢活化系统 受试物 Ames试验 Ames试验 斑点试验和平板掺入试验 证明Ames试验重要性的应用实例： 国外曾开发了一种降低妇女妊娠反应的药物“反应停”，由于其 药效显著，在60-70年代十分流行 但随后人们就发现畸形儿的出生率明显增高，而且生产畸形儿的 妇女大多曾服用“反应停”，后来采用Ames试验发现这种物质的确 具有很强的致突变作用，因此这种药物被禁止使用 但如果能在这种药物上市之前就进行Ames试验检测，那么这种大 量出生畸形儿的悲剧完全可以避免 由于生物体内、体外可能存在的差异，可在体外加入哺乳 动物（如大鼠）微粒体酶系统，使待测物活化，使Ames试验的准确率达80-90%。 用途：广泛用于检测环境和食品中是否存在化学致癌物。 特点：快速、准确、费用廉价  1．斑点试验只局限于能在琼脂上扩散的化学物质，大多数多环芳烃和难溶于水的化学物质均不适宜用此法。此法敏感性较差，主要是一种定性试验，适用于快速筛选大量受试化合物。 2．平板掺入试验可定量测试样品致突变性的强弱。此法较斑点试验敏感，获阳性结果所需的剂量较低。点试获阳性结果的浓度用于掺入试验（每皿0.1ml），往往出现抑（杀）菌作用。 3．致变作用迟缓或有抑菌作用的试样，培养时间延长至72h。 4．挥发性的液体和气体试样，可用干燥器内试验法进行测试。 5．目前，Ames试验作为检测环境诱变剂的一组试验中的首选试验，广泛应用于致突变化学物的初筛。但是，与今天快信息、高效率的社会要求相比，该试验程序还嫌繁琐，方法不够简便，有待于创建新的更为快速灵敏、简单易行的环境诱变剂短期生物测试法。