高赖氨酸蛋白基因lys转化银耳.pdfVIP

第七屆海峽兩岸真菌學學術研討會論文集 15–22 高賴氨酸蛋白基因 (lys) 轉化銀耳 1 1 1 1 1 謝寶貴 盧啟泉 饒永斌 朱虎 孫淑靜 2 3 1 4 江玉姬 朱堅 應正河 鄭金貴 1. 生命科學學院 2. 食品科學學院 3. 園藝學院 4. 農產品品質研究所，福建農林大學，福州 350002 摘 要 用 CAMV35S 啟動子驅動高賴氨酸蛋白基因 (lys) ，構建了 lys 基因銀耳表達載體 pCB-lys 。限制性內切 酶介導法 (REMI) 把 pCB-lys 轉化銀耳酵母狀分生孢子。營養缺陷型鑑定和顯微形態觀察都表明轉化 子是銀耳酵母狀分生孢子。目的基因特異引物 PCR 、潮黴素抗性測定對轉化子進行了驗證。測定了轉 化子的 GUS 活性，結果大多數轉化子都能檢測，說明外源基因可在銀耳酵狀分生孢子細胞中表達。 測定了 7 個轉化子的氨基酸和賴氨酸含量，轉基因菌株都比受體菌株 Tau811 高，氨基酸總量增幅 2.5%–20.5% ，賴氨酸增幅3.6%–16.6% 。 關鍵詞：高賴氮蛋白基因、限制性內切酶介導轉化、酵母狀分生孢子、銀耳。 前 言 pBI121 均為本實驗室保藏。 銀耳芽孢 Tau811 菌株為本實驗室誘變獲 銀耳是一種滋補食品，藥用價值很高，但 得的肌醇缺陷型菌株 (謝等，2004b) 。 是其蛋白質含量較低，尤其是賴氨酸含量。 銀耳的生活史不同於其他食用菌，它會產生 培養基 酵母狀分生孢子 (yeast-like conidia) ，這種分 完全培養基 (CM) 葡萄糖 20.0 g 、蛋白 生孢子的生長特性類似酵母，並且它對潮黴 腖 2.0 g 、酵母膏 2.0 g 、K2HPO4 1.0 g 、 素敏感、沒有 GUS 背景 (謝等，2004a) ，在 KH PO 0.46 g 、MgSO 1.0 g 、瓊脂 20.0 g 。 2 4 4 開展遺傳轉化時可用 hpt 基因作為篩選標 基礎培養基 (MM) 葡萄糖 20.0 g 、酒石 記、GUS 作為報告基因，用超聲波介導可 酸銨 1.5 g 、K HPO 1.0 g 、KH PO 0.46 g 、 2 4 2 4 獲得較高的轉化效率(謝等，2005) 。本項研 MgSO4 0.5 g 、鹽酸硫胺素 120.0 µg 、瓊脂 究擬通過基因工程技術來改良銀耳的營養品 20 g 。鑑別培養基 (IM) 是在 MM 培養基上 質。 添加肌醇至終濃度 10 µg/mL 。 再生培養基 (RM) 麥芽糖 10 g 、葡萄糖 10 g 、蛋白 4 g 、磷酸二氫鉀 0.46 g 、磷酸 材料與方法 腖