刘小龙-循环肿瘤DNA(ctDNA)检测策略及临床意义教学讲义.ppt

* * We used digital polymerase chain reaction – based technologies to evaluate the ability of circulating tumor DNA (ctDNA) to detect tumors in 640 patients with various cancer types. * * Comparison of Circulating Tumor DNA, CA 15-3, and Circulating Tumor Cells as Blood-Based Biomarkers 灵敏度： 偱环肿瘤DNA：85% CA 15-3：59% 灵敏度： 偱环肿瘤DNA：90% 偱环肿瘤细胞：67% Comparison of Circulating Biomarkers to Monitor Tumor Dynamics and Predict Survival. 结论：相对于蛋白类诊断标志物CA15-3及血液中的偱环肿瘤细胞，ctDNA在监测肿瘤的动态发展中具有更高的灵敏度。 血浆中ctDNA的含量与预后密切相关，含量越高，病人的5年生存率越低（P0.001）。 ctDNA含量的增高及CTC数目的增加，病人的预后显著变差，而CA15-3没有预后判断功能。 监测ctDNA的突变率比监测cfDNA浓度，对胃癌动态发展的监控灵敏度更高。 利用区域捕获测序技术检测乳腺癌原发瘤及肝脏转移瘤的基因突变情况，并监控血液中ctDNA在治疗过程中的动态变化。 ctDNA在监测肿瘤的动态发展中具有更高的灵敏度和特异性； ctDNA能比蛋白类标志物CA15.3更早的预测肿瘤动态发展情况。 相对于传统的影像学及蛋白类血清标志物，通过评估ctDNA的突变频率能更早、更准确的预测结肠癌患者肿瘤经治疗后的动态发展情况。 ctDNA的分析指标 4 cfDNA含量 1 2 3 5 ctDNA突变频率 微卫星杂合性 cfDNA完整性 ctDNA甲基化频率 利用亚硫酸氢盐平行测序检测不同肿瘤患者（肝癌，乳腺癌，肺癌，鼻咽癌等）血浆DNA甲基化发生情况及血浆DNA拷贝数异常情况，用于肿瘤的诊断及肿瘤负荷的监测； 血浆中甲基化癌症诊断灵敏度为74% ，特异性为94%，具有较好的癌症诊断应用价值。 Percentage of bins showing hypomethylation in HCC patients and chronic hepatitis B virus (HBV) carriers with cirrhosis 血浆DNA的甲基化程度在肝癌患者显著上升，可用于肝癌的诊断；灵敏度为81%，特异性为94%； 血浆DNA拷贝数异常用于肝癌诊断，灵敏度为81%，特异性为88%。 Clin Cancer Res?July 1, 2004?10;?4420 Journal of Thoracic Oncology: 2011 6 :1632-1638 World J Gastroenterol. 2011 Nov 28; 17(44): 4917–4921. Int. J. Cancer: 131, 1153–1157 (2012) ONCOLOGY REPORTS 32: 505-512, 2014 ctDNA的分析指标 4 cfDNA含量 1 2 3 5 ctDNA突变频率 微卫星杂合性 cfDNA完整性 ctDNA甲基化频率 血浆中短链DNA分子发生杂合性丧失的频率显著高于长链DNA分子。 血浆中短链DNA的 cyclin D2 基因（D12S1725）的微卫星杂合性缺失，患者的预后显著变差，可作为乳腺癌患者重要的预后标志物。  在卵巢癌患者中，短链DNA微卫星杂合性缺失的频率达到67%, 化疗后下调达到45%。 血浆中 M6P/IGF2R (D6S1581) 的杂合性缺失与卵巢癌患者的生存率相关，有杂合性缺失的病人预后较差 (p = 0.030)。 ctDNA在肿瘤诊断与预后领域的应用 ctDNA临床应用面临的挑战 1 2 3 4 发展适合临床应用的ctDNA检测技术(快速、精准、低成本) 个体化的ctDNA标志物 ctDNA在肿瘤个性化精准治疗领域的应用 2015.06.12 * 目前蛋白质类血清标志物筛查及影像学诊断是常用来作为肿瘤诊断与预后的评估依据，但二者均存在灵敏度及特异性不足等问题。尤其在蛋白质类血清标志物，灵敏度和特异性较差，且由于其在血中的半衰期较长，长达浓度数周甚至数月，其浓度水平与病变程度相关性等，因此迫切需要一种理想的标志物，最新研究表明，循环肿瘤细胞及循环肿瘤DNA在肿瘤诊断、治疗和监控等方面的临床表现逐渐崭露