发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒实时荧光RTPCR检测方法的建立.pdfVIP

．方法研究． 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒实时 荧光RT．PCR检测方法的建立 吕燕宁 王全意 窦相峰 王小梅庞星火 【摘要l 目的建立新型发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的伽M帅探针实时荧光Rn PcR检测方法并进行评估，为发热伴血小板减少综合征监测中新型布尼亚病毒感染的排查提供实验 室检测依据。方法利用新型布尼亚病毒s片段基因的特异性序列设计引物和探针，探针5’端标记 FAM，3’端标记TAMRA。优化反应体系与反应条件，并对不同浓度含有目的基因的质粒以及在发热 伴血小板减少综合征监测中收集的32份样本和流行性出血热病毒阳性样本进行核酸检测，验证该方 法的特异性、敏感性和重复性。结果该方法所检测的32份可疑病例的临床样本中，3份为阳性，与 国家疾病预防控制中心下发的试剂以及商品化试剂盒的检测结果一致；流行性出血热病毒检测结果 为阴性。对目的基因的检测灵敏度达4×102拷贝／“；重复性实验中，变异系数为0．125％一O．28％。 全部检测过程从样本的核酸提取至检测完成仅需2．5h左右。结论本文建立的1kM帅探针实时 荧光RT．PcR法是一种检测新型发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的特异、快速、敏感的方法。该 方法的建立将有益于今后开展发热伴血小板减少综合征监测以及应急临床样本中新型布尼亚病毒感 染的排查和快速检测。 l关键词】 布尼亚病毒；发热伴血小板减少综合征；实时荧光RT—PcR 酗蝴蛐删0f_R枷瓤盯·Pcll№t蹦姗啦删鸣恤NovdB雠y耐哪“她龀S* 他n蛔髓硝hv盱’rI恤nI咖蛔q咖埒山sy硼哪簋 加y，矾·柚嘈，黝^旧Q切m一，DD￡，撕毋喈，肼^旧胁o-撇i，f哺^临肋皤一^∞，驷曙‰加’臃e∞嚣 n嘲州洳口，．dc口脯讲(＆咖呵100013) 白帆卵n幽呵^lI‘Jh：删^『cQl姗叫。层概口：蜘瓿m@126．∞m To IAb咖鳅】mlj嘲№ in a f．or Buny枷m。，bB8ed叩T8qM蛐hy晡di枷蚰pmbetechnoIogyord盯佃pm“delahtorydiagn∞is tlIen叭l in蠡∞tion ofFev盯witlI Bunya“m8 du一唱tIle¨rveillaIlce711lmmb∞ytopeniaSy玳I删n∞．Met蛔山 A a to oft-lenol pBirof州m啪明dpmbew∞d髓i印edidenti母S8％m帅t萨ne B帅y盯iⅢ8．11lepmbe labeIedWit}IFAMaIId3’endlabeled埘tI．TAMRA．ne 帅5’end PcR嘲cti硼sy8钯m鲫d咖diti伽w哺 co肿en协m伽0f tIIe DNA咖t曩iIIingt哪吐萨ne，32盹川m8啪pI∞coll∞ted 叩timized．Di圩毫他nt plasmid 缸粕tIle叫rveiIl鲫∞0f Han诅柚“m8 syndr叫啪，蚰d Fev盯witI．．11ImllII烈忡nia p∞iti代咖pl髑眦 tlIi8method幻凹alua地小e of 3 钯s埘u8ing 8p∞讯c时，盼鹏iti“ty蚰d地pmducibilityme聃8ay．R鹤山b 32 fbm山e totlle p∞iti垤咖pl∞慨det∞ted帅伽gcIinic●鲫pl∞∞lI∞ted8uBp∞ted蝴，∞nf．oImed resuI协obtailIed Chine酹N