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第五章 发酵工程 一、概述 问题： 1、什么是发酵工程？它研究的内容是什么？ 2、发酵工程应用微生物的目的和范围是什么样的？ 3、导致发酵工程的发展出现转折的关键技术有哪些？（发展简史如何？） 发酵工程： 狭义发酵工程：是微生物工程，即利用微生物的特定功能，通过现代工程技术为人类制造有用产品或提供服务的技术。 广义发酵工程：除了微生物工程之外，还包括细胞发酵工程、动物细胞发酵工程和生化工程。 导致发酵工程的发展出现转折的关键技术： 经历了四个转折时期： 2）第一代微生物发酵技术——纯培养技术的建立 特点：单种微生物的分离和纯培养技术的确立，使发酵技术从天然转变为纯培养发酵，实现了第一个技术进步（也可称为第一转析点）。因此人类开始了人为地控制微生物的发酵进程。 从19世纪末到20世纪30年代，出现的产品有乳酸、酒精、面包酵母、丙酮-丁醇等厌氧产品和柠檬酸、淀粉酶、蛋白酶等好氧产品。 利用固定化技术构建的生物反应器和生物传感器，使发酵设备更加小型化，发酵操作更加自动化； 因此，细胞工程和基因工程育种技术、固定化技术以及发酵过程中的计算机程序控制技术的建立，是发酵技术发展的第四个转折点。 (1)发酵所用的原料以碳水化合物为主(淀粉、糖蜜或其他农副产品) ，不含有毒物质。 (2)微生物菌种是进行发酵的根本因素，通过变异和菌种选育，可以获得高产的优良菌株并使生产设备得到充分利用，也可以因此获得按常规方法难以生产的产品。 (3)发酵过程一般来说都是在常温常压下进行的生物化学反应，反应安全，要求条件简单。 (4)发酵对杂菌的污染的防治至关重要。反应必需在无菌条件下进行。 (5)能容易地生产复杂的高分子化合物，如酶、光学活性体等。 (6)发酵过程是通过生物体的自动调节方式来完成的，反应的专一性强，因而可以得到较为单一的代谢产物。 (7) 工业发酵与其他工业相比，投资少，见效快，并可以取得较显著的经济效益。 二、微生物细胞的培养技术 （一）、微生物细胞的营养及培养基 二、微生物细胞的培养技术 （二）、培养基灭菌的目的、要求 一、定义 1，培养基灭菌的定义 是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。工业规模的液体培养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 2，灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。 二、培养基灭菌的目的 1，在发酵过程中夹杂其它杂菌造成的后果： ? 生产菌和杂菌同时生长，生产菌丧失生产能力； ? 在连续发酵过程中，杂菌的生长速度有时会比生 产菌生长得更快，结果使发酵罐中以杂菌为主； ? 杂菌及其产生的物质，使提取精制发生困难 ? 杂菌会降解目的产物； ? 杂菌会污染最终产品，杂菌会污染最终产品； ? 发酵时如污染噬菌体，可使生产菌发生溶菌现象 3，灭菌的方法 ? 化学法 – 化学药品灭菌法 ? 物理法 – 干热灭菌法 – 湿热灭菌法 – 射线灭菌法 （三）、微生物细胞的培养方法 ： 根据培养基流动性的差异分为液体培养和固体培养。 1、液体培养：用液体培养基进行微生物的生长繁殖和发酵的技术。 发酵工业的主要方法 根据培养液的深浅分 表面培养法 深层培养法 2、固体培养法：培养基是固体的培养方法。工业上主要利用皮、豆渣及其它杂物等固体材料为基质，并添加其它营养和水分组成。 根据物料堆放的厚薄分为: 薄层发酵 ： 木盘或苇帘，1～2cm，培养箱或曲室内 厚层发酵 ： 深槽或池，架设帘，30cm以上，接种后通气 （三）、微生物培养的一般工艺流程 第一阶段：发酵原料的预处理 第二阶段：发酵过程的准备 第三阶段：发酵过程 第四阶段：产品的分离与纯化 （四）、微生物培养条件及工艺条件的控制 工艺条件控制的目的：就是要为生产菌创造一个最适的环境，使我们所需要的代谢活动得以最充分的表达。 （四）、微生物培养条件及工艺条件的控制 1、温度的影响及控制 2、PH值的影响及控制 一、pH对菌体生长和产物合成的影响 1）pH影响酶的活性 当pH抑制菌体中某些酶的活性时，使菌体的新陈代谢受阻 2）pH影响微生物细胞膜所带电荷的状态，从而改变细胞膜的渗透性，影响微生物对营养物质的吸收及代谢产物的排泄，因此影响代谢的正常进行。 二、 工业上提高溶液中溶氧水平的措施是： 1）、提高设备的供氧能力（如提高通风强度、增加搅拌速度、通气中掺入纯氧和增设挡板等）； 2）、