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水环境生物在线监测技术研究进展 赵鹏，项光宏 聚光科技杭州（股份）有限公司，杭州 310052 摘要：随着环境污染加剧，常规理化在线检测手段已经难以满足水体的全面质量评估，尤其 是无法实现水生态健康、综合毒性和卫生学指标等的有效监测。因此急需水环境在线生物监 测技术为补充，建立完备的水质监测系统，确保水资源环境安全。水环境在线生物监测包括 生物群落在线监测、生物毒理学在线监测和细菌在线监测等几方面，其技术手段主要有流式 细胞术、急性毒性试验和酶底物检测法等，本文就上述技术进展进行综述。 关键词：水环境、在线、生物监测、生物群落、生物毒理学、细菌 1 前言 水环境中存在大量水生生物群落，各类水生生物之间及水生生物与其赖以生存的水环境 之间存在着互相依存又互相制约的密切关系。当水体受到污染而使水环境改变时，各种不同 的水生生物由于对环境的要求和适应能力不同而产生不同反应，以此能够了解污染对水生生 物的直接危害和影响，判断水体污染类型和程度。目前，主要的水环境生物监测方法有生物 群落法、急性毒性试验和细菌学检测等，围绕上述方法，我国确定了生物监测技术路线和目 标，即以生物群落监测技术为主，以生物毒理学监测技术为辅，优先开展水环境生物监测， 逐步拓展大气污染植物监测；巩固现有水生生物监测网，逐步健全全国流域生物监测网络， 以达到通过生物监测手段说清环境质量变化规律的目的。 然而，相应的传统检测手段普遍存在操作繁琐、检测时间长、专业要求高等不足，难以 满足人们对水质生物检测的迫切需求，随着社会发展及水体保护意思的加强，各种快速、便 捷的水环境在线生物监测技术得到人们日益重视，并希望以之为基础，建立完备的水质监测 系统，确保人们饮水安全。正因如此，本文拟就现存的主要水环境在线生物监测技术进行综 述，着重从生物群落在线监测技术、生物毒理学在线监测技术和细菌在线监测技术三方面入 手，介绍并分析了流式细胞术、急性毒性试验和酶底物检测法的原理、应用、优缺点和产品 等。 2 生物群落在线监测技术 水体中生活着各种生物，如浮游生物、着生生物、底栖动物、鱼类和细菌等。由于它们 的群落结构、种类和数量变化能反映水质污染情况，故此在水污染调查中，被列为主要研究 项目之一。传统的生物群落法主要有污水生物系统法和生物指数法，它们注重用某些生物种 群评价水体污染状况，这需要熟练的生物学分类知识，并且工作量大、耗时多，还有指示生 物出现异常情况的现象，因此给准确判断带来一定困难。 20 世纪 70 年代末期，流式细胞术在生物医学领域趋于成熟和完善，并开始应用于水 体微型生物的研究，凭借其即时、快速分析能力，使之对微型生物的水质现场动态监测成为 可能。而后，流式细胞术凭借其样品制备简单、可进行快速多参数数据采集、精确测定、不 易受溶解有机物干扰、可进行多元数据分析及分选功能等优越性引起研究者愈来愈多的关 注，从而成为水生和环境生物群落研究中的一项重要在线监测工具。其应用包括浮游植物等 微型生物的识别、记数和生物量研究，微型生物的细胞周期分析、生理研究、生态研究及异 [1-3] 样细菌病毒的识别、计数和生物量研究等 。 通常，流式细胞术（flow cytometry ）是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微粒的一 种现代分析技术，能够凭借微小生物颗粒的多种物理、生物学特性实现定量分析，并可完成 特定细胞群体的筛选分析。可以说流式细胞仪是当代激光、流体力学、光学和电子计算机等 学科技术高度发展的产物，是生命科学众多研究领域中最先进的仪器之一。 流式细胞分析系统在水环境监测中最常用于浮游植物等微型生物和细菌、病毒的识别、 计数和生物量研究，其工作原理如下：悬浮在液体中的细胞或微粒进入流式细胞仪充满鞘液 的流动室内，其中鞘液压力（高速流动）与样品流压力（流速较慢）不同，两者压差达到一 定程度时，在鞘液约束下，细胞或微粒会排成单列从流动室的喷嘴高速喷出，成为细胞液柱。 细胞液柱与入射激光束垂直相交于测量区，细胞被激光照射后产生光散射，某些含色素颗粒 （如藻细胞）还可以发出荧光，散射光与荧光穿过滤光片，被光电倍增管或光电二极管接收 并转变为电信号，通过信号加工、处理和存储，再用专门的计算机软件对存储数据进行图像 显示、分析、统计、运算，即可灵敏、准确、特异地获得单细胞的一系列重要参数。