2013-2014学年高中生物人教版选修三同步辅导与检测课件：1.2 基因工程的基本操作程序_.pptVIP

第2节　基因工程的基本操作程序;预习提纲;2．利用PCR技术扩增目的基因：PCR技术是一项在生物体外⑩ 特定DNA片段的核酸合成技术 (1)原理：利用? 原理，将基因的核苷酸序列不断加以复制，使其呈指数方式增加。指数扩增约为2n(n为扩增循环的次数)。 (2)条件：已知目的基因的? 序列、? 、? 、?__。 (3)过程：目的基因DNA受热变性后解链为? ，与引物结合，然后在? 的作用下进行延伸形成DNA。 3．化学合成目的基因：如果? 比较小，核苷酸序列又? ，也可以利用DNA合成仪化学合成。;三、将目的基因导入受体细胞;2．下列属于获取目的基因的方法的是(　 　) ①利用mRNA反转录形成　②从基因组文库中提取　③从受体细胞中提取　④利用PCR技术　⑤利用DNA转录　⑥人工合成 A．①②③⑤ B．①②⑤⑥ C．①②③④ D．①②④⑥;3．在基因工程中，切割载体和含有目的基因的DNA片段时，需使用(　 　) A．同种限制酶 B．两种限制酶 C．同种连接酶 D．两种连接酶;4．要想将目的基因与载体连接起来，基因操作时应选用(　 　) A．只需DNA连接酶 B．只需限制性核酸内切酶 C．同一种限制性核酸内切酶和DNA连接酶 D．不同限制性核酸内切酶和DNA连接酶;5.回答有关基因工程的问题： (1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生______末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生______(“相同”、“不同”)黏性末端的限制酶。 (2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是______。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用______处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为______。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成______，常用抗原—抗体杂交技术。;(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的______中，然后用该农??菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______上。;;1．基因文库是将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，叫做基因文库。建立基因文库的目的就是为获得大量的目的基因做准备。如果基因文库中含有一种生物的所有基因，这个基因文库就叫做基因组文库。如果基因文库中含有一种生物的部分基因，这个文库就叫做部分基因文库。如以某生物的mRNA反转录基因产生的多种互补DNA(cDNA)片段，并与载体连接后储存在一个受体菌群中的cDNA文库。基因文库就相当于某种生物的基因仓库，储备着该生物大量的基因。;2．PCR技术是一项在生物体外复制特定的DNA的核酸合成技术。它遵循的原理与DNA复制原理相同，条件是有一段已知的目的基因的核苷酸序列和根据核苷酸序列合成的引物，原料是四种脱氧核苷酸，也需要多种酶(如DNA聚合酶等)。在PCR扩增仪上自动复制。 3．如果基因比较小，核苷酸序列又是已知的，可以利用人工合成目的基因，该法主要有两种：反转录和化学合成法。详细过程请见变式迁移1的点评内容。; 在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是(　 　) A．用mRNA为模板反转录合成DNA B．以4种脱氧核苷酸为原料人工合成 C．将供体DNA片段转入受体细胞中，再进一步筛选 D．由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA 解析：现在已知的条件只是某小片段基因的碱基序列，而没有相应的mRNA和蛋白质的氨基酸序列，所以只能以4种脱氧核苷酸为原料来人工合成。 答案：B;变式迁移;点评：(1)获取目的基因的方法也可分为两种：直接提取法和人工合成法。 ①直接提取法：即直接通过一定手段从含有目的基因的细胞中提取，常用于获取原核细胞中的目的基因。 ②人工合成法：常用于获取真核细胞中的目的基因，该法主要有两种：反转录法和化学合成法。;(2)DNA复制与PCR技术的比较;;4．由于受体细胞有植物、动物、微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此，基因表达载体的构建上也会有所差别，不可能是千篇一律的。; 基因工程又叫基因拼