二次谐波成像及其在生物医学中应用.pdf

第23卷，第1期 深圳大学学报理工版 V01．23．No．1 ANDENGINEERING 2006年1月 JOURNAL0FSHENZHENUNIVERSITYSCIENCE Jan．2006 文章编号：1000-2618(2006)01—0001—09 二次谐波成像及其在生物医学中的应用 屈军乐1，陈丹妮1，杨建军2，许改霞1，林子扬1，刘立新1，牛憨笨1 (1．深圳大学光电子学研究所，深圳518060；2．南开大学现代光学研究所，天津300071) 摘 要：二次谐波成像是近年发展起来的一种三维光学成像技术，具有非线性光学成像所特有的高空 间分辨率和高成像深度，可避免双光子荧光成像中的荧光漂白效应，是一种理想的非侵入生物活体成像方 法．生物组织的病变往往会引起微观结构的变化，而二次谐波信号对组织的结构对称性变化高度敏感，因 此二次谐波成像对于某些疾病的早期诊断或术后治疗监测，具有很好的生物医学应用前景．介绍二次谐波 成像的发展现状，生物组织中二次谐波信号的产生机理，二次谐波成像的实现手段及其在生物医学领域的 应用． 关键词：二次谐波；非线性光学；生物组织；显微成像；早期诊断；高分辨率；活体成像 6 中图分类号：043；Q 文献标识码：A 射效应最小，激发光能深入组织内部，相比传统的 引 言 显微镜，如激光扫描共焦显微镜，可以做更深层的 成像．例如，Shi—weichu等人用二次谐波和三次 1961年红宝石激光器发明不久，Franken等人 mm的体内晶胚的发 谐波显微成像观察斑马鱼1．5 用红宝石激光器输出波长为694nm激光穿过一个 育过程心』，可清楚地观察到从最初的细胞分芽繁殖 石英晶体时，产生347nm的紫外光。1o．这是最早 到原肠胚的形成，直到组织的形成，而不需要对样 harnlonic 观察到的光学二次谐波(second genera-品进行任何处理．此外，二次谐波成像技术的发射 tion，SHG)现象，标志着非线性光学的诞生．从与激发波长相距较远，因此信号易于有效分离． 此，SHG被用于倍频激光器以得到短波长激光．近 对活体生物样品，sHG还具有一些独特的优 年随着激光技术、检测技术和计算机技术的快速发 点．SHG一般为非共振过程，光子在生物样品中只 展，利用二次谐波进行生物组织的三维成像成为生 发生非线性散射，不被吸收，因此不产生伴随的光 物医学成像领域中的热门课题．引起广泛关注． 化学过程，可减小对生物样品的损伤．实验结果表 230 SHG是一个二阶非线性过程，二次谐波成像具 明，采用1 nm激发光观察斑马鱼受精卵时，虽 excitednuores—然激发光的平均功率高达100mw，且经过12h连 有与双光子激发荧光(two-photon cence，TPEF)显微成像类似的特性．如SHG和续观察，注入受精卵的能量超过了1kJ，但受精卵 TPEF的激发效率与激发光的平方成正比，因此仅并未受到光损伤，仍然保持细胞活性旧1．另外，在 在焦点附近才有足够的光子能量来激发，非线性效 许多情况下，组织的病变过程中的线性光学特性变 应的强局域性减少了成像时非焦点处发光产生的背 化很小，传统的线性光学成像技术不能检测．生物 景干扰，提高了信噪比和三维空间分辨率；同时使 组织发生病变时一般