4-2动物微生物--培养基的配制、消毒与灭菌（实验六）.pptVIP

* 紫外线灭菌 紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200~300 nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。 在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。 紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成过氧化氢（H2O2）。O3和H2O2均有杀菌作用。 * 紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m为宜。 为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯前，可在无菌室内(或接种箱内)喷洒3%～5%石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。 无菌室内的桌面、凳子可用2%～3%的来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。 * 灭菌的试管培养基冷至50 ℃ 左右再搁置，以防斜面上冷凝水太多。 斜面长度不超过试管总长的一半。 * 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24－48小时，以检查灭菌是否彻底。 * 实验任务 每组配制700 mL牛肉膏蛋白胨培养基（P241） 趁热将培养基分装至6把试管（6×7支，不超过管高1/5）；剩余的培养基装入锥形瓶中（每瓶约150 mL ） 对试管、锥形瓶进行包装，贴上标签（培养基名称、配制时间、组别） 高压蒸汽灭菌（121 ℃,灭菌20min） * 作业 实验报告 思考题1：培养基配置好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是否为无菌的？ 思考题2：如果需要配制一种含有某抗生素的固体培养基，其中抗生素的终质量浓度（或工作浓度）为50ug/mL，你将如何操作？（提示：抗生素在高温下易失效） * 实验六 培养基的制备 消毒与灭菌 培养基配制实验原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。 * 培养基配制要素 营养：碳源、氮源、能源、生长因子、水分和无机盐； 适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力； 一定的氧化还原电位； 合适的渗透压。 * 培养基的分类 根据微生物的种类和实验目的的不同，培养基分类可以按以下方式： 按成分的不同分 按培养基的物理状态分 按培养基的用途分 * 按照培养基的成分来分 天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质 合成培养基:用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基 半合成培养基:以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基 * 按照培养基的物理状态 固体培养基：加入凝固剂，如1.5% ~ 2.0%琼脂 半固体培养基：加入少量凝固剂，如 0.2% ~ 0.7%琼脂 液体培养基：不含任何凝固剂 * 按照培养基的用途分 基础培养基 营养培养基（加富培养基） 鉴别培养基：含有特定化合物或试剂。某种微生物在这种培养基上培养后，它所产生的某种代谢产物与这种特定的化合物或试剂能发生某种明显的特征性反应，根据这一特征性反应可以将某种微生物与他种微生物区别开来。 选择培养基：利用微生物对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入这类物质，抑制不需要的微生物生长，而利用所需分离的微生物生长，从而达到分离或鉴别某种微生物的目的。 * 培养基灭菌 配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物 微生物生长繁殖： 消耗养分 改变培养的酸碱度 产生毒素或者抑制物 * 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 应用最广泛的细菌基础培养基，普通培养基 牛肉膏： 3 g 蛋白胨： 10 g NaCl： 5 g 琼脂： 15-20 g 水： 1000 mL pH： 7.4~7.6 * 马铃薯培养基（PDA）的制备 用来培养真菌 马铃薯： 200 g 蔗糖（葡萄糖） 20 g 琼脂：