化学品毒理学评价的程序和试验方法第32部分精子畸形试验.docVIP

ICS13.100 C52 化学品毒理学评价程序和试验方法 第32部分：精子畸形试验 Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals Part 32：Sperm abnormality test XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 前 言 根据《中华人民共和国职业病防治法》制定本部分。 GBZ/T 240《化学品毒理学评价程序和试验方法》现分为以下三十三部分： ——第1部分：总则； ——第2部分：急性经口毒性试验； ——第3部分：急性经皮毒性试验； ——第4部分：急性吸入毒性试验； ——第5部分：急性眼刺激/腐蚀性试验； ——第6部分：急性皮肤刺激性/腐蚀性试验； ——第7部分：皮肤致敏试验； ——第8部分：鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）； ——第9部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验； ——第10部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验； ——第11部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验； ——第12部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验； ——第13部分：哺乳动物精原细胞/初级精母细胞染色体畸变试验； ——第14部分：啮齿类动物显性致死试验； ——第15部分：亚急性经口毒性试验； ——第16部分：亚急性经皮毒性试验； ——第17部分：亚急性吸入毒性试验； ——第18部分：亚慢性经口毒性试验； ——第19部分：亚慢性经皮毒性试验； ——第20部分：亚慢性吸入毒性试验； ——第21部分：致畸试验； ——第22部分：两代繁殖毒性试验； ——第23部分：迟发性神经毒性试验； ——第24部分：慢性经口毒性试验； ——第25部分：慢性经皮毒性试验； ——第26部分：慢性吸入毒性试验； ——第27部分：致癌试验； ——第28部分：慢性毒性试验合并致癌试验； ——第29部分：毒物代谢动力学试验； ——第30部分：枯草杆菌基因重组试验； ——第31部分：体内哺乳动物骨髓细胞姊妹染色单体交换（in vivo SCE）试验； ——第32部分：精子畸形试验； ——第33部分：神经毒性筛选组合试验。 …… 本部分为GBZ/T 240 的第32部分。 　本部分起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、本部分主要起草人：陆丹　 本部分规定了试验。 本部分适用于化学品对雄性生殖细胞的遗传毒性检测。 GBZ/T 224界定的及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 精子畸形perm malformation 精子形态的改变。 试验目的 检测对精子。 试验 通过适当的途径使，经过一定时间后处死动物，取其附睾，制备涂片，经固定、染色，在显微镜下计数畸形精子。 试验方法 仪器和器械 生物显微镜、解剖剪、镊子、、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。 试剂 1%伊红染色液称取伊红1 g溶于100 m蒸馏水中。 生理盐水甲醇（分析纯） 6.3　受试 受试应新鲜配制。有资料溶液稳定。固体受试应溶或悬于适当的溶剂或载体中，并进行稀释。液体受试可直接使用或稀释后使用。根据受试的理化性质（水溶性和/或脂溶性）确定受试所用的溶剂或载体。但所用溶剂或载体在使用剂量水平对受试动物应不产生毒作用，且不与受试发生任何化学反应。通常用蒸馏水、生理盐水、植物油、食用淀粉、羧甲基纤维素钠等。如不是常用溶剂或载体，应参考资料说明其成份及选。 对照 试验应设置阳性和阴性对照（溶剂或载体），除不使用受试外，其他处与处理组。 阳性对照可采用环磷酰胺40 mg/kgw~60 mg/kg.bw、甲基磺酸甲酯（MMS）50 mg/kg或丝裂霉素C（MMC）1.0 mg/kg1.5 mg/kg.bw，经口或腹腔注射（首选经口）给予。没有文献资料或历史资料证实无致突变作用时应设空白对照。 实验动物和饲养环境 使用6周～8周龄雄性小鼠。动物体重平均体重的20%。动物应随机分组，每个处理组和对照组至少5只分析。动物购回后应适应实验室新环境5 d。 饲养环境 动物实验的环境设施应符合应规定，应有合理的动物管理措施并严格控制环境条件。动物应按组分笼饲养，用常规饲料喂养，自由水。 剂量设计 受试至少应设三个剂量组。分别取1/2 LD50、1/5 LD50、1/10 LD50或1/20 LD50剂量。当受试的LD50大于5 g/kg时，可取5 g/kg为最高剂量。 试验步骤 常用途径为经口灌胃方式。受试溶液一次给予的最大不应超过2 mL/100g。连续5 d。一般于首次染毒后第35处死动物。 用颈椎脱臼法处死小鼠，腹腔，睾丸分离附睾，用眼科剪剖开附睾组织， min～5 min 6.7.4.2 固定干燥后涂片放入甲醇液中固定5min，取出晾干染色将涂