DNA重组技术的基本工具201836.ppt

DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 DNA连接酶的缝合作用 * 复习 1、生物体的遗传物质是什么？ 生物体遗传的基本单位是什么？ 2、为什么生物界的各种生物间的 性状有如此大的差别呢？ 3、生物的性状是怎样表达的？ 基因工程的产物： 多彩小鱼 转基因小鼠 转基因小猪 辣椒香蕉 蓝色玫瑰 黑籽番茄 基因工程的概念： 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 一、基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 孟德尔提出基因的分离定律和自由组合定律 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 摩尔根证明基因在染色体上， 并提出基因的连锁互换定律。 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 艾弗里证明DNA是主要遗传物质，DNA可 从一种生物个体转移到另一种生物个体。 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 克里克等提出中心法则 DNA RNA 蛋白质 转录 翻译 逆转录 复制 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 1963年尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的 遗传密码，1966年霍拉纳用实验加以证明。 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 1)基因转移载体的发现 2)工具酶的发现 3)DNA合成和测序技术的发明 4)DNA体外重组的实现 5)重组DNA表达实验的成功 6)第一例转基因动物问世 7)PCR技术的发明 没有基础理论的研究成果，没有技术方面的创新发明，基因工程不可能诞生，也不可能迅速崛起。 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 重组DNA 导入 形成 思考：在以上过程中关键步骤或难点是什么？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”——载体 §1-1 DNA重组技术的基本工具 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 粘性末端 平末端 酶的特异性 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1 来源：主要从原核生物中分离纯化。 2 作用：识别特定核苷酸序列，使每条链中 特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 3 作用结果：产生黏性末端或平末端。 思考：限制酶在于原核生物中的作用？ 思考 在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？ 现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保持一种稳定状态？ 怎样才能使外来的DNA失效从而保护自身？ 原核生物很容易受到自然界中外源DNA的入侵， 但是长期的进化过程中，这些原核生物却没有因为 外源DNA的入侵而灭绝。 根据我们刚刚掌握的知识，你能推测这其中的 原因吗？ 原核生物细胞中的限制酶会将外源DNA切割掉，使之失效，以保证自身的安全，但是不会切割自身的DNA，这是原核生物在长期进化过程中形成的一套防御机制。 寻根问底： A T G C A T G C 2、作用：限制酶切割磷酸二酯键 3、结果：形成黏性末端 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaⅠ 平末端 　　　平末端 3、结