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DADE BEHRING快速鉴定板操作手册 MicroScan? 快速厌氧菌鉴定板操作手册 快速厌氧菌鉴定板操作手册 预期应用 MICROSCAN快速厌氧菌鉴定板是为从临床人体样本中分离出的厌氧菌进行快速鉴定而设计的。 摘要和原则 用改良的传统和染色实验进行厌氧菌的鉴定。实验中的生物体MCFARLAND3混悬液可从高压消毒的去离子水中得到。MICROSCAN快速厌氧菌鉴定板含24种脱水底物，再水化后接种细菌混悬液并在35-37有氧环境中培养4小时。因为MICROSCAN快速厌氧菌鉴定板可测定作用的酶，鉴定板中生物体的生长则不是必需的。培养后，pH变化，某些底物的利用或其他生化反应可解释鉴定结果。 预防 1．MICROSCAN快速厌氧菌鉴定板和试剂只用于体外诊断。 2．不要让肽酶试剂、艾利希氏试剂、二甲苯或任何鉴定底物接触眼睛、皮肤或衣物。 3．在整个过程中注意无菌技术并预防微生物危害，特别注意接种后的鉴定板是否含有潜在的致病微生物。 4．所有材料在丢弃前必须先进行高压消毒。 储存 在2-8储存鉴定板和试剂。 样品的采集和准备 合适的样品，没有一般厌氧菌类，应根据V.P.I.、厌氧菌实验室手册、WADSWORTH厌氧菌手册、C.D.C.的细菌学实验室方法和临床微生物手册所介绍的程序，在原始隔离的媒质中采集、运输、放置。 注意：含抗生素媒质如LKV（卡那霉素/万古霉素），或类细菌胆汁七叶树甘糖（BBE）琼脂，苯乙基酒精（PEA）等上的菌落不能应用于鉴定板接种的准备。 提供的材料 快速鉴定板 20张工作表单 操作手册 需要但未提供的材料 矿物油 盖盘 肽酶试剂 0.5%N-N-二甲基- -萘胺 0.8%磺胺酸 艾利希氏试剂 二甲苯 50 L带无菌吸头的吸管 过氧化氢 接种液3ML高压消毒的去离子水 无菌棉签或无菌接种环 木制涂药棒 3，4和5MCFARLAND硫酸钡标准混悬液 搅拌器 培养器，不含CO2（35） 快速厌氧生物型密码本 微生物质量控制： 产气荚膜杆菌 sordellii fragilis magnus 操作过程 A准备鉴定板 1．从冰箱中取出鉴定板。如果干燥剂缺失或破损，或包装的完整性被破坏（已开启，被刺破或撕裂）鉴定板就不能使用了。 2．打开包装取出鉴定板，立即从铂纸包中取出鉴定板。再水化之前让鉴定板温度与室温一致。鉴定板可以堆放在干净的盖盘下。 B准备接种 1．给鉴定板接种之前先要观察测试微生物的耐氧性、纯度、革兰氏染色反应和菌落的形态。 2．用无菌棉签或接种环，从经24-48小时培养的无选择性媒质中取足够的菌落放入含3ML培养液（经高压消毒的去离子化水）的试管，形成相当于至少是MCFARLAND 3标准液但小于等于MCFARLANGD 5标准液的混悬液。如果需要摇匀以使其乳化。一旦混悬液准备好，就应在15分钟内接种鉴定板。 C接种鉴定板 1．将鉴定板从铂纸包中取出并在标签上注明样本号。 2．加50 L细菌混悬液到每个含底物的小孔以及两个控制小孔。在此不推荐用巴斯德吸管来接种。 D生化油物覆盖 滴1-2滴矿物油覆盖尿素及吲哚。 E培养 1．将鉴定板3-5成组堆放与盖盘下以避免水分蒸发。 2．将接种后的鉴定板放入35-37的无二氧化碳培养箱中培养4小时。 F解读鉴定板 1．至少在解读鉴定板之前30分钟将肽酶试剂从冰箱中取出。在4时肽酶会沉淀，但在室温下它会重新溶解。不要将肽酶试剂暴露在升高的温度中以促使其结晶沉淀物的溶解，因为高温会使其变质。 2．鉴定板应在白色背景下用间接光线解读。 3．在培养4小时后记录所有底物的结果，不要加任何其他试剂：BGAL，……URE和TRE。比较硝基苯基孔和BGAL……AFU，MNP。任何黄色应被记为阳性。 （非选择性媒质包括TSA，布鲁氏菌，心脑灌输或哥伦比亚琼脂，都含5%羊血。） 4．加一滴肽酶到LEU，……TRY和BNAC小孔。 A）至少让颜色变化30分钟然后记录结果。在加入试剂后不要等3分钟后才记录结果。存在任何粉色或红色应解释为阳性。这些小孔的颜色会随时间变暗所以阴性的黄色会变成比较暗的橘黄色，但这仍应解释为阴性反应。只有出现粉色或红色反应才能被记录为阳性。一些小孔和控制小孔比较会是较暗的橘色，但仍应记为阴性。 B）在 –萘胺控制小孔加入肽酶后，小孔的颜色应是黄色的。如果有任何粉色或红色存在，则肽酶试剂就应丢弃，以避免错误的阳性结果。 5．两个控制小孔辅助解释反应。 A）BNAC= -萘胺控制。加入肽酶试剂后此小孔应为黄色或橘色。 B）NPC=硝苯基控制。此小孔应为无色的。 6．加一滴二甲苯到吲哚小孔。用木制药签搅动此小孔内容物，在2-3分钟后解读。 7．各加一滴磺胺酸先到N-N二甲基- -萘胺后到硝酸盐小孔，2-3分钟后解读。 8．加2-3滴3%过氧化氢到BGAL小孔，等2