第五章DNA生物合成.pptVIP

DNA具有储存、传递（包括复制、转录、翻译）和接受（反转录）遗传信息的功能。 DNA的生物合成包括DNA的复制、损伤修复和重组。 DNA复制是保持DNA分子的忠实拷贝过程，具有高度的忠实性，DNA修复和重组是影响遗传信息本身结构的调整过程，保持遗传信息的完整性。 一. DNA的半保留复制 （一）概念 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。 子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 4）大肠杆菌DNA聚合酶 Ⅳ和Ⅴ 1999年发现DNA聚合酶 Ⅳ和Ⅴ，参与DNA的错误倾向修复。 当DNA受到严重损伤时，正常的DNA聚合酶在该处不能形成正确的碱基配对而停止修复，此时诱导产生这两种酶，能在损伤部位继续复制，但修复的准确性较差，会造成较高的突变率，这虽然会杀死许多细胞，但至少可以克服复制障碍，使少数突变的细胞得以存活，从而延续种系。 （三）与DNA的复制过程有关的其他酶和蛋白质因子 （以大肠杆菌为例 ） 除DNA聚合酶外，还需要20多种不同的酶和蛋白质因子的参与，整个复合物统称为DNA复制酶系统(DNA replicase system)或者复制体(replisome)。 解旋酶（helicase） ：DNA复制时，解旋酶沿着DNA母链滑动使之解旋，同时打开双链之间的氢键，这一过程所消耗的化学能通过ATP水解提供。 （三）与DNA的复制过程有关的其他酶和蛋白质因子 （以大肠杆菌为例 ） 拓扑异构酶（topoisomerase） ：用于消除螺旋状DNA解旋时产生的拓扑应力。拓扑异构酶I主要集中在活性转录区，与转录有关；拓扑异构酶II分布在染色质骨架蛋白和核基质部位，同复制有关。 单链DNA结合蛋白（single strand DNA binding protein, SSB） 引物酶（primase） ：促使引物合成 。 DNA连接酶（DNA ligase） 图5-9. 大肠杆菌起始点oriC的复制引发模型A. 约20个各带1个ATP 的DnaA蛋白 结合于  9bp序列，使DNA围 绕着复合物卷成一圈B.三个富含A=T的 13bp重复序列被变性C.在DnaC蛋白 的帮助 下DnaB蛋白进一步 使DNA解螺旋，以  备引物和DNA的合成 表5-3大肠杆菌复制起始点引发DNA复制所需的蛋白质 （二）延伸 DNA的两条链都能作为模板。 由于DNA分子的一条链的走向为3′→5′，另一条链为5′→3′；而所有已知DNA聚合酶的合成方向都是5′→3′。 为了解决这个矛盾，1968年，日本学者Okazaki等提出了DNA的不连续复制模型，认为： 沿3′→5′模板链合成的子链是连续合成，而沿5′→3′方向合成的子链是分段合成，由许多DNA片段连接起来的。 1、冈崎片段和半不连续复制 以复制叉向前移动的方向为标准，一条模板链是3′→5′走向，在其上DNA能以5′→3′ 方向连续合成，称为前导链（leading strand）； 另一条模板链是5′→3′走向，在其上DNA也是从5′→3′ 方向合成，但是与复制叉移动的方向正好相反，所以随着复制叉的移动，形成许多不连续的片段，最后连成一条完整的DNA链，该链成为滞后链或后随链（lagging strand）。 冈崎片段(Okazaki fragment)： 在不连续的后随链DNA合成中形成的DNA短片段，在原核生物为1000～2000核苷酸，真核生物约100～200核苷酸。1968年冈崎发现。 （三）终止 复制的最后，大肠杆菌染色体的两个复制叉在终止区域相遇，这个区域含有20个碱基对序列，叫做Ter序列（Terminus，终止的意思）。该序列排列在染色体上造成一种陷阱，即复制叉到此就停止不再向前进行。 Ter序列的功能是结合一种叫做Tus的蛋白质(terminus utilization substance, 即终止利用物质). Tus-Ter复合体能够阻止单方向前进的复制叉，该复合体只能对一个复制叉起作用。 （三）终止 当一个复制叉遇到Tus-Ter复合体时，复制停止；另一复制叉在遇到已停止的复制叉时复制也随之停止。最后的数百个位于这些大的蛋白质复合体之间的碱基对尚没被复制。 其后两条亲代母链解开，通过修复方式填补空缺，形成了两个交联在一起的环状染色体。这种拓扑互联环称为连环体（catenane）, 大肠杆菌的交联DNA环的分离需要拓扑异构酶IV（一种II型拓扑异构酶），分离开的染色体在细胞分裂时分别进入子细胞。包括真核生物的DNA病毒