食品微生物实验之革兰氏染色.pptVIP

崇德和合 博学敦行 食品微生物实验 之 革兰氏染色 主讲：曹冠华 背景小知识 革兰氏染色法是细菌学中广泛使 用的一种鉴别染色法，这种染色 法是由一位丹麦医生 汉斯·克里斯蒂安·革兰 （Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。 经革兰氏染色后，可将细菌分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）。 背景小知识 革兰氏阳性菌通常对青霉素类、第一（或第二）代头孢菌素、万古霉素、克林霉素等高度敏感。 革兰氏阴性菌对第三代头孢菌素（头孢他啶等）、氨基糖苷类（庆大霉素等）多粘菌素等高度敏感。 根据细菌的革兰氏染色性质，有利于对疾病做出诊断。同时也可做为选用抗生素的参考。 一、实验目的及要求 1、了解革兰氏染色的原理。 2、掌握革兰氏染色的方法。 3、学会观察及描述细菌的形态结构。 二、革兰氏染色的基本原理 G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同，经两种不同的染料处理后，呈现出不同的颜色，从而加以区分。 革兰氏阳性菌细胞壁结构图（左边）和为革兰氏阴性菌细胞壁结果图（右边） 二、革兰氏染色的基本原理 G+的细胞壁主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，细胞壁通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。 二、革兰氏染色的基本原理 G-的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂（番红）的颜色，因此呈现红色。? 革兰氏阴性菌结构图 三、实验器材及试剂 器材： 显微镜、酒精灯、载玻片、接接环等 菌种： 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 药品： 初染液：草酸铵-结晶紫 媒染液：碘液 复染液：番红溶液 脱色液：95%乙醇等 四、操作步骤及要点 　　 　　 　　 涂片 加热干燥固定 结晶紫初染 水洗 碘液媒染 水洗 95% 乙醇脱色 水洗 番红复染 水洗 镜检 1min 1min 1min 30sec 革兰氏染色操作视频 操作要点 1、在涂片区滴上香柏油，用油镜观察。 2、加热干燥固定时的温度不要太高，否则细 胞壁会受到损伤，细胞变形。 3、掌握好乙醇脱色时间，将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。 操作要点 4、如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。过于密集的细菌，也常常呈假阳性。 五、染色结果 大肠杆菌平板菌落图 大肠杆菌电镜图 大肠杆菌革兰氏染色图 （G-） 五、染色结果 金黄色葡萄球菌电镜图 金黄色葡萄球菌革兰氏染色图 （G+） 金黄色葡萄球菌平板菌落图 六、思考题 1．涂片后为什么要进行固定?固定时应注意什么? 2．试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。 崇德和合 博学敦行