辣椒疫霉Phytophthoracapsici多聚半乳糖醛酸酶.PDF

安徽农业大学学报, 2014, 41(5): 783-788 Journal of Anhui Agricultural University [DOI] 10.13610/ki.1672-352x010 网络出版时间：2014-8-27 16:08:00 [URL] /kcms/doi/10.13610/ki.1672-352x010.html 辣椒疫霉 （Phytophthora capsici ）多聚半乳糖醛酸酶 PCIPG2 N-糖基化突变体的构建与表达分析 1, 2 2 1* 李艳青 ，夏海波 ，张修国 (1. 山东农业大学植物保护学院，泰安 271018 ；2. 潍坊科技学院生物工程研发中心，潍坊 261000) 摘 要：为研究辣椒疫霉（Phytophthora capsici ）多聚半乳糖醛酸酶PCIPG2 N-糖基化对其酶活性的影响，从 基因组文库中分离克隆到 Pcipg2 基因，利用定点突变技术突变 3 个潜在的糖基化位点(N34, N76, N137)；构建并表 达N-糖基化突变蛋白，并对突变蛋白进行温度和缓冲液体系处理检测其活性。结果发现 Pcipg2 基因在辣椒疫霉侵 染寄主的前期表达并起重要作用。PCIPG2 蛋白在 30°C ，pH5.0 (P 0.05) 的缓冲液环境下活性最高。单个的Pcipg2 糖基化位点 N34 、N76 、N137 对 PCIPG2 的致病性起正调控作用，而 3 个糖基化位点相互协调的功能抑制 PCIPG2 的活性，在 PCIPG2 表达致病过程中起负调控。N-糖基化在 PCIPG2 酶活性上起直接作用，使得 PCIPG2 酶在较低 水平上保持较高的稳定性。 关键词：辣椒疫霉；多聚半乳糖醛酸酶 PCIPG2；N-糖基化；活性 中图分类号：S436.418.1 文献标识码：A 文章编号：1672−352X (2014)05−0783−06 Construction and expression analysis of N-glycosylation mutations from PGIPG2 of Phytophthora capsici 1, 2 2 1 LI Yanqing , XIA Haibo , ZHANG Xiuguo (1. School of Plant Protection, Shandong Agricultural University, Tai’an, 271018; 2. RD Center for Bioengineering, Weifang University of Science Technology, Weifang 261000) Abstract: The effect of N-glycosylation from polygalacturonase PCIPG2 of Phytophthora capsici was ana- lyzed. To analyze the function of P. capsici polygalacturonases, we mutated the potential N-glycosylation sites (N34, N76 and N137) of Pcipg2 (cloned the Pcipg2 gene from the genomic library) using site-directed mutagene- sis. Expressed N-glycosylation proteins of mutants were treated with temperatu