不同培养条件对植物乳杆菌p8产共轭亚油酸及lai基因mrna表达水平的影响-微生物学专业论文 word格式.docxVIP

reverse transcription PCR, and in progress of Real-time PCR to detected the mRNA expressed level of 16 different cultivated groups. This paper indicated that, LAI gene expressed in all the groups, but the expressed level were different. The lower level groups is the 4 th, 6 th and 12 th groups. And in the groups of the 1 th , 5 th, 10 th , the mRNA expressed level is much higher. These indicated that different cultivation is influenced the mRNA expressed levels in P8.Key words: Lactobacillus plantarum;Linoleic acid isomerase;The Real-time PCR;The mRNA level; Variance analysisDirected by: Prof. ZHAO GuofenApplicant for Master degree: Du Meiting(Microbial Molec ular Biology) (College of Life Sicence. Inner Mongolia Agricultural University. Hohhot 010018. China)目录1引言 11.1共轭亚油酸 11.1.1共轭亚油酸的概述 11.1.2共轭亚油酸的分子结构、发现及其来源 11.1.3共轭亚油酸的合成方式 21.1.4共轭亚油酸的作用机理及其生物学作用 31.1.5共轭亚油酸异构体的检测方法 51.1.6共轭亚油酸未来的发展前景 61.2亚油酸异构酶 71.2.1亚油酸异构酶的概述 71.2.2亚油酸异构酶的来源 71.2.3亚油酸异构酶的分离纯化 71.2.4亚油酸异构酶的作用机理 81.2.5亚油酸异构酶的生物学性质 81.2.6影响亚油酸异构酶合成的因素 101.3核酸的定量测定 101.3.1化学发光检测法 101.3.2分光光度计检测法 111.3.3电化学检测方法 111.3.4荧光光度计分析法 111.3.5共振光散射分析检测法 11Real-time PCR 技术 12Real-time PCR 技术的概念及原理 12Real-time PCR 技术的类型 12Real-time PCR 技术的检测模式 12Real-time PCR 技术的应用 131.5实验的技术路线 141.6选题的目的和意义 142材料与方法 152.1实验材料 152.1.1实验菌株 152.1.2实验主要药品与试剂 152.1.3主要仪器 162.1.4培养基 162.1.5主要溶液 172.2实验方法 182.2.1植物乳杆菌 P8 182.2.2不同条件下植物乳杆菌 P8 的生长情况 182.2.3共轭亚油酸含量及菌液生物量的测定 202.2.4植物乳杆菌 P8 总 RNA 的提取 202.2.5植物乳杆菌 P8 总 RNA 浓度的检测 222.2.6植物乳杆菌 P8 总 RNA 完整性的检测 232.2.7质粒标准品的制备 232.2.8反转录 272.2.9引物的设计合成 282.2.10荧光定量 RT-PCR 反应283结果与分析 293.1植物乳杆菌 P8293.1.1植物乳杆菌 P8 生长曲线的绘制293.1.2植物乳杆菌 P8 产共轭亚油酸标准曲线的绘制303.1.3不同条件下植物乳杆菌 P8 产共轭亚油酸303.2不同条件下植物乳杆菌 P8 总 RNA 的检测363.3反转录 PCR373.3.1LAI 基因的反转录 PCR 电泳检测结果373.3.2内参基因 16SrRNA 的反转录 PCR 电泳检测结果383.4质粒标准品的制备 383.4.1植物乳杆菌 P8 基因组 DNA 的检测383.4.2亚油酸异构酶目的片段 PCR 扩增的检测393.4.3菌落 PCR 的检测393.4.4克隆质粒的提取结果 403.5实时荧光定量 PCR 结果403.5.1不同浓度的内参基因 16SrRNA 和 LAI 基因的荧光定量 RT-PCR 结果403.5.2不同培养条件内参基因 16SrRNA 和目的基因 LAI 荧光定量 RT-PCR 结果. 443.