达优冻存试剂盒-达科为.pdfVIP

产品信息和操作指南 ® 达优 冻存试剂盒 Cat# : UH-M1002-050 本试剂盒专用于科研，而非用于诊断 （1301） ® 达优 冻存试剂盒 UH-M1002-050 目录 目录 1 产品说明 2 试剂盒内容 3 需要实验者自行准备的试剂与仪器： 3 细胞冻存程序 4 细胞复苏程序 5 注意事项： 7 实验记录 10 1 产品说明 在ELISPOT检测的应用中，往往需要用到冻存的淋巴细胞样 品作为检测细胞。由于ELISPOT检测的是细胞的免疫功能，不仅 仅需要保证细胞的存活率，而且还要保证细胞的功能不发生变化。 传统的细胞冻存方法通常是为了保存细胞种，对细胞存活率的要 求不高，更没考虑保持细胞原有的免疫状态，所以传统的细胞冻 存方法已经不能满足ELISPOT检测的要求。 考虑到ELISPOT检测的特殊性，达科为公司推出了达优®冻存 试剂盒，在冻存液中添加了一系列对细胞有特殊保护作用的保护 剂。达科为公司在自己的实验室以及国内数家客户的实验室做了 细胞冻存与复苏的实验，并且对复苏之后的细胞做了ELISPOT检 测。结果表明，淋巴细胞的存活率超过90%，ELISPOT斑点形成频 率与新鲜细胞完全相同。 根据我们实验的经验，完美的细胞冻存效果需要优质的冻存 试剂加上严格、规范的实验操作。二者缺一不可，不可偏颇。为 了帮助国内的客户解决好细胞冻存的问题，达科为公司特此编撰 这份详细的细胞冻存、复苏实验操作手册，仅供参考。 2 试剂盒内容 名 称 规格 存放条件 ® 25mL 达优 重悬液(Resuspension Medium) -20 ℃ ® 25mL 达优 2 ×冻存液( 2× Freezing Medium) -20 ℃ 需要实验者自行准备的试剂与仪器： 热失活胎牛血清（Heat Inactivation of Fetal Calf Serum HI-FCS ）：4 ℃解冻血清，完全解冻之后，放入56°C水浴30分钟， 让补体蛋白失活。手册中所有的血清均是指热失活补体的血清。 R10培养基：RPMI-1640培养基，含谷氨酰胺，加入10%血清， 加入1%双抗。 R0培养基：RPMI-1640培养基，含谷氨酰胺，加入1%双抗，不 加血清。 ELISPOT无血清培养基：含有谷氨酰胺和双抗，打开即用。 超净工作台； 可控温度离心机，配备50mL，15mL离心管的水平转头，建议 使用专业的细胞离心机；离心管应采用无菌锥底聚丙烯管； P20, P200, P1000 微量移液器及吸嘴； 无菌0.5mL、1.5mL EP管，5mL、10mL吸管； 电动吸液器（Pipette Aid ）及吸头； 细胞活性计数设备； 细胞冻存盒“Mr. Frosty ”及无菌细胞冻存管，2mL ，外螺旋； -80℃冰箱； 液氮罐； 37℃水浴锅； 3 细胞冻存程序 1. 将备用的细胞冻存管做上详细的记号。细胞冻存管放入-20℃热 ® ® 平衡，细胞冻存盒、达优 重悬液、达优 2×冻存液放入 4 ℃热 平