昆虫杆状病毒基因工程七节.pptVIP

构建删除半胱氨酸蛋白酶基因的BmNPV和AcMNPV的杂交杆状病毒表达载体的特点： ①寄主范围广 ②重组病毒的构建、筛选和纯化变得容易和迅速，加快了重组病毒的繁殖。 ③既可利用Sf21、Sf9细胞及大型Tn-5细胞进行无菌状态下的悬浮培养法快速生产重组蛋白，又可在家蚕幼虫中表达进行大规模生产，有利于实现产业化水平的开发。 ④比BmNPV 和AcMNPV表达系统具有更高的表达效率，重组蛋白生产水平内提高50～60%。 7.5 杆状病毒表达系统的应用 1.重组杆状病毒作为表达外源基因的载体 2.重组杆状病毒作为基因工程病毒杀虫剂 1.重组杆状病毒作为表达外源基因的载体 表达产物按生物种类分： (1) 人类与人类病毒蛋白 (2) 动物与动物病毒蛋白 (3) 植物与植物病毒蛋白 (4) 昆虫蛋白与细菌蛋白 表达产物按用途分： (1) 生化及检测试剂 (2) 免疫疫苗 (3) 治疗药物 ? ? ? ? 基因来源 蛋白名称 糖基化 蛋白水解切割 抗原性 细胞内定位、表达水平或生物学活性 DNA病毒 ? ? ? ? ? 乙型肝炎病毒 核抗原（C区） ? 分泌 + 27~28nm核心颗粒；与细胞蛋白结合具激酶活性；免疫原性；磷酸化 ? 核心抗原（preC区） ? 信号肽，不分泌 + 免疫原性；不溶解的细胞质聚合体；磷酸化 ? 表面抗原（S区） + ? + 装配成22nm脂蛋白颗粒；免疫原性 ? 表面抗原（S2-S区） + ? + 分泌22nm颗粒；免疫原性；细胞内脂蛋白颗粒；豆蔻酸酰化 单纯疱疹病毒Ⅰ型 DNA复制（U18） ? ? + 复制起始原点ori特异性结合 ? 糖蛋白D + ? + 刺激淋巴细胞扩增；免疫原性；中和作用；保护作用 人巨细胞病毒 gp55-116(gB) + 效率低的多聚 + 免疫原性 多瘤病毒 T抗原 ? ? + ori特异性DNA结合 ? T抗原 ? ? + 结合鼠p53；核；磷酸化；寡聚化 ? 中T抗原（MTAg） ? ? + 结合禽pp60c-src;在pp60c-src存在时磷酸化；与细胞质膜结合 Summary of porcine cytokines produced by exoression systems Co-expression of porcine precursor IL-18 and procine caspase-1 in silkworm larvae IL-18 concentration in haemolymphBiological activity of porcine mature IL-18 produced by silkworm 猫白介素Intercat 重组杆状病毒表达的部分动物外源蛋白质 基因来源 蛋白名称 抗原性 细胞定位、表达水平或生物学活性 半乳头瘤病毒 E2蛋白（融合） + DNA结合性、磷酸化 （BPV1） E2反式激活因子（全长） + DNA结合性、磷酸化 半冠状病毒 S膜粒基因 + 细胞表面 血凝素-酯酶（HE） + 血球吸附及乙酰酯酶活性，膜结合，二硫键结合的二聚体 牛白血病病毒 P34tax + 反式激活BLVLTR启动子、磷酸化、细胞质、免疫原性 牛轮状病毒 VPI结合蛋白、转录酶 + 免疫原性、与杆状病毒P10蛋白丝状结构联结 猪轮状病毒 外衣壳蛋白中和抗原（VP4） + 免疫原性、中和作用 伪狂犬病毒 糖蛋白（gp50） + 免疫原性、保护作用、O-连结糖基化 糖蛋白结构域（gp50T) + 免疫原性、保护作用、O-连结糖基化 狂犬病毒 糖蛋白（G） + 免疫原性、中和作用、保护作用、质膜 核蛋白（N） + 免疫原性 鸡马立克病病毒 糖蛋白B抗原（gB） + 有抗原性，但无中和活性、糖基化与天然系统相似 鸡瘟病毒（流感病毒） 血凝素 + 血细胞凝集、血细胞吸附、溶血活性、红细胞融 鸡新城疫病毒 血凝素—神经氨酸苷酶（HN） + 血细胞凝集、神经氨酸苷酶活性、血细胞吸附活 性、 免疫原性，细胞表面 2.重组杆状病毒作为基因工程病毒杀虫剂 杆状病毒用作生物杀