08第八章 真菌孢子的产生、萌发和计数.pptVIP

第八章 真菌孢子的诱导、萌发和计数 促使真菌孢子的产生和萌发实验、在植物真菌病害研究上很重要： 病害真菌的鉴定是根据子实体和孢子形态。 孢子萌发实验是杀菌剂药效测定的主要方法。 一 、真菌孢子产生的条件 产孢特点： 真菌产生孢子是由其遗传特性决定，同时受环境条件影响很大。 产生孢子的条件比生长的条件严格。 产有性孢子的条件比产无性孢子的条件严格。 病害真菌在营寄生生活时产无性孢子（分生孢子），寄主死亡以后形成有性孢子（子囊孢子）。 真菌营养生长和产孢子繁殖条件不同，但营养生长积累了产生孢子所需要的养分。 各种真菌产生孢子需要不同的条件，一般： 生长和生殖要求不同的条件。低等生物由环境决定它们生长和生殖。 低等生物在适宜生长条件下不发生生殖作用；有利于生殖生长的条件不利于生长。 生长条件没有生殖条件严格，在不能生殖的条件仍能生长。 生殖以前必须有生长，生长为生殖创造了条件。 二 、促使真菌产生孢子的途径 调节培养基的种类和成分 培养基与孢子产生的关系最大，采用不同的培养基或改变它们的成分是促使真菌孢子产生最主要的途径。 减低养分的浓度 养分高产孢少，其中C源、N源影响最大 一般移植后开始产生菌丝体→养分降低→孢子 一般适当降低培养基中养分的浓度或将真菌在养分很高的培养基中培养以后，再移植到养分较低的培养基中都能促进孢子的生长。 营养物质的浓度有时也影响产生孢子的种类，产生无性孢子所需的浓度低于有性孢子。 改变C源，N源以及C/N比 适合于菌丝生长的C源、N源不一定利于孢子的产生。 复杂的碳水化合物对菌丝生长不一定好，但利于孢子的产生。 如单糖（葡萄糖、果糖）很容易被利用，但不利于孢子产生，如复杂碳水化合物水解成葡萄糖，过程很慢，因此环境中葡萄糖浓度不高，利于产生孢子。 促进孢子产生时一般：多糖好于单糖，蔗糖好于葡萄糖。 用蔗糖、乳糖和淀粉代替葡萄糖。许多真菌促孢都用淀粉作C源，N源对产孢没有C源显著，估计是影响pH。 C/N研究不多：其含量太高对孢子的产生都不利。 选用不同的培养基 利用植物组织或煎汁作培养基可以促进真菌孢子的产生，但由于灭菌后使营养成分发生改变，所以在寄主上产孢，灭菌后不一定产孢，真菌在植物组织或其周围产孢。 如WA＋胡萝卜占试管高25cm，灭菌后倒平板，用来培养腐霉属（Pythiun）真菌可促使卵孢子产生。 微量元素和Vit 加入微量元素和Vit可促进孢子的产生 Zn、Cu与黑曲霉（Aspergillus niger）与孢子形成的关系很大 许多真菌需VitB,另外某些真菌（Achlya）在生殖时需要有刺激生殖的激素。 培养基的理化性状 许多真菌在固体或半固体培养基上比在液体中易产生孢，可能与通气和蒸发有关。 pH：在一定浓度内，降低pH促进某些真菌产孢 灭菌方法：主要是改变培养基成分。 培养条件 温度：在高温或低温或高低温交替培养，有时可促进孢子产生，温度还影响产生孢子的种类。 光照：许多真菌要有一定的光照才能产生孢子。 如白腐核菌：（Sclerotinia sclerotiorum）在琼脂培养基上产生菌核，移到剩有很厚一层清水的琼脂培养基中的三角瓶，阳光照射2-3个产子囊菌和子囊孢子。 光照长短对孢子产生有不同影响，以紫外线、近紫外线和蓝光的作用明显、红光刺激少数真菌产孢。 三、孢子数目测定方法 1、血球计数板（hemocytometer）法 有2种规格，25x16和16x25 血球计数板的计数室是一个大格，分为若干个中格，每个中格又分成若干个小格。 25x16的规格就是计数室先分成25个中格，每个中格再分成16个小格，共计400格小格，无论哪种规格都是400个小格。 2、平板涂布计数法 （1）样品稀释液的制备 准确称取土壤样品10g，放入装有90mL无菌水并放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s即成10-1稀释液；再吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸头吸取10-2稀释液1 mL，移入装有9mL无菌水的试管中，也吹吸3次，即成10-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4, 10-5, 10-6、10-7、10-8,10-9等一系列稀释菌液。 用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。 （2）平板接种 （1）混合平板培养法 （2）涂抹平板计数法 （3）培养与计数 （4）计算 3、最大似然数法 The most probable number (MPN) method can be used for microbes that will grow in a liquid medium; it is a